TFPI-2基因表達與肝癌細胞生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：檢測肝癌組織和癌旁正常肝組織中，組織因子途徑抑制物2（TFPI-2）基因表達的差異；轉(zhuǎn)染TFPI-2基因真核表達載體（pcDNA3.1-TFPI-2）入人肝癌細胞株HepG2，篩選其穩(wěn)定表達細胞株；探討TFPI-2在肝癌細胞生長、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及機制。 方法：第一階段：以TFPI-2 cDNA為探針，應用原位雜交技術檢測肝癌組織和癌旁正常肝組織中TFPI-2 mRNA表達的差異；應用免疫組化和Western Blot印

2、跡方法，檢測兩種組織中TFPI-2蛋白表達的差異。第二階段：利用脂質(zhì)體將pcDNA3.1-TFPI-2真核表達載體轉(zhuǎn)染人肝癌細胞株HepG2，G418篩選穩(wěn)定表達的細胞系，RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后TFPI-2 mRNA的表達，Western Blot檢測轉(zhuǎn)染前后培養(yǎng)液中TFPI-2蛋白的表達；第三階段：應用MTT法測定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-TFPI-2對HepG2細胞生長曲線的影響，并用流式細胞儀分析轉(zhuǎn)染前后HepG2細胞增殖周期的改變

3、；利用Transwell小室法檢測轉(zhuǎn)染前后肝癌細胞穿膜細胞數(shù)，評價肝癌細胞體外侵襲遷徙能力的變化。 結果：與正常肝組織相比，肝癌組織中TFPI-2 mRNA的表達顯著降低，TFPI-2陽性標記指數(shù)分別為30.66±2.47和88.23±1.43（P<0.05）；免疫組化檢測肝癌組織中TFPI-2蛋白的表達顯著降低，TFPI-2陽性標記指數(shù)分別為22.54±1.22和46.60±1.80（P<0.05）；Quantity One軟

4、件分析Western blot TFPI-2蛋白條帶灰度值，與β-actin比值分別為1.14±0.13和0.89±0.15，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。成功轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-TFPI-2的HepG2細胞，證實有TFPI-2 mRNA和蛋白的表達；與未轉(zhuǎn)染的細胞相比，轉(zhuǎn)染后的HepG2細胞生長明顯受到抑制，細胞增殖周期阻滯于G0/G1期；轉(zhuǎn)染TFPI-2的HepG2細胞體外侵襲能力顯著下降（穿膜細胞數(shù)為45.2±5.6 vs8