下調(diào)UBC9基因表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞侵襲與遷移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：實(shí)驗(yàn)采用shRNA法對下調(diào)UBC9基因后人肝癌細(xì)胞株MHCC97h遷移能力和侵襲能力變化進(jìn)行觀察，并探究其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1、采用事先設(shè)計(jì)并委托公司合成的針對UBC9基因的質(zhì)粒，而后對人肝癌細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分組為：正常肝癌細(xì)胞組（Normal組）、脂質(zhì)體組（Lipo-2000組）、空載質(zhì)粒(NC-shRNA)組及目的質(zhì)粒（UBC9-shRNA）組。
　　2、采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Q

2、uantitative Real Time-PCR，qRT-PCR）和蛋白印跡（Western Blot）方法同時(shí)檢測各實(shí)驗(yàn)組肝癌細(xì)胞于轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后UBC9mRNA及UBC9蛋白質(zhì)的表達(dá)量改變。
　　3、采用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell體外實(shí)驗(yàn)分別對各實(shí)驗(yàn)組肝癌細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力進(jìn)行檢測。
　　4、采用蛋白印跡（Western Blot）法對各實(shí)驗(yàn)組肝癌細(xì)胞內(nèi)的β-catenin、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量改變

3、進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：
　　1、UBC9-shRNA于轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞之后的24h檢測mRNA表達(dá)量及48h檢測蛋白質(zhì)表達(dá)量，結(jié)果可見目的質(zhì)粒組UBC9無論在mRNA水平還是在蛋白水平較其余實(shí)驗(yàn)對照組均明顯下降。
　　2、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示UBC9基因的表達(dá)經(jīng)過下調(diào)后，UBC9-shRNA組肝癌細(xì)胞和其余對照組相比，其遷移能力下降。
　　3、Transwell體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示UBC9的表達(dá)經(jīng)過下調(diào)后，UBC9-shRN

4、A組的肝癌細(xì)胞侵襲能力及其遷移數(shù)量較其他對照組明顯下降。
　　4、Western Blot結(jié)果顯示，UBC9-shRNA組中的β-catenin、MMP-2、MMP-9蛋白水平較其余實(shí)驗(yàn)對照組均明顯下降。
　　結(jié)論：
　　1、在肝癌細(xì)胞中，UBC9-shRNA無論在mRNA水平還是蛋白水平均可以有效的地下調(diào)UBC9表達(dá)，其侵襲能力及遷移能力同時(shí)也下降。
　　2、下調(diào)了UBC9的表達(dá)后，肝癌細(xì)胞可能可以通過Wnt通