下調(diào)RbAp48表達(dá)抑制子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移.pdf

1、研究背景:
　　子宮體癌常常被稱做子宮內(nèi)膜癌，可發(fā)生于任何年齡段，但以圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后中老年女性多見。典型表現(xiàn)多為:無明顯誘因出現(xiàn)經(jīng)期延長(zhǎng)、經(jīng)量增多、絕經(jīng)后異常陰道流血或者分泌物增多，是女性常見的惡性生殖系統(tǒng)腫瘤之一。近幾年來，發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重威脅女性生命。子宮內(nèi)膜癌分很多亞型，如腺癌、漿液性乳頭狀癌、透明細(xì)胞癌以及未分化癌等，其最常見亞型是腺癌，約占發(fā)病率的80％-90％，與自然環(huán)境、家族遺傳、腹型肥胖、Ⅱ型糖尿病、絕經(jīng)晚、

2、初潮早、卵巢癌病史、不恰當(dāng)使用雌/孕激素及不孕等多種因素相關(guān)。目前對(duì)早期病人治療方法主要是手術(shù)及化療、放療，病人5年生存率較高，而對(duì)晚期病人治療比較困難，多采用姑息治療，病人預(yù)后往往很差，5年生存率低。因此關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、新的治療途徑、治療靶點(diǎn)及靶向治療藥物的摸索仍在持續(xù)進(jìn)行。
　　PcG（多梳蛋白polycomb group）蛋白是調(diào)控生長(zhǎng)發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子，最早在果蠅中被發(fā)現(xiàn)，在物種間高度保守。PcG蛋白可以分為兩個(gè)

3、核心蛋白復(fù)合體:Polycomb抑制復(fù)合體1(PRC1)和Polycomb抑制復(fù)合體2(PRC2)。PRC1含有至少10個(gè)蛋白亞基，如RING1A/1B、BMI1; PRC2則由EZH2、RbAp48、SUZ12和EED四個(gè)蛋白亞基組成。
　　視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白48(Retinoblastoma associated protein-48，RbAp48)作為PRC2亞基中一個(gè)亞單位，是WD-40家族中的一員，在植物和動(dòng)物中相對(duì)

4、保守，主要由CAF-1復(fù)合體、E(Z)復(fù)合體、NURF復(fù)合體、NuRD復(fù)合體、SIN3復(fù)合體、核蛋白等組成。近些年來，某些資料表明RbAp48在宮頸癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、惡性血液病、人獲得性免疫缺陷綜合征等多種惡性腫瘤中獲得廣泛研究并在其中承擔(dān)重要生物學(xué)作用。有研究表明:RbAp48主要功能是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及遷移，但是其抑制腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移及增殖能力也有相關(guān)報(bào)道。但是，目前關(guān)于RbAp48在子宮內(nèi)膜腺癌中的作用及其

5、發(fā)揮作用機(jī)制的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。
　　研究目的:
　　本文旨在探討RbAp48在正常子宮內(nèi)膜組織（增生期、分泌期、絕經(jīng)期）、子宮內(nèi)膜不典型增生組織及不同分化程度的子宮內(nèi)膜腺癌組織（高、中、低分化）中的表達(dá)情況，是否有表達(dá)差異;分析子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48的表達(dá)與某些臨床病理特性的關(guān)系;進(jìn)一步探討下調(diào)RbAp48表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌KLE、HEC1A細(xì)胞系增殖、侵襲、遷移能力的影響，探求子宮內(nèi)膜腺癌治療的新型潛在分子靶點(diǎn)

6、，為下一步臨床治療打下堅(jiān)實(shí)理論基礎(chǔ)。
　　研究方法:
　　1、采集合適的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法分析:72例正常子宮內(nèi)膜組織（增生期21例、分泌期27例、絕經(jīng)期24例），27例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，52例不同分化水平的子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋白的表達(dá)情況。
　　2、分析某些臨床病理特性與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48表達(dá)是否有相關(guān)性。
　　3、采取慢病毒來下調(diào)RbAp48基因在子宮內(nèi)膜腺癌K

7、LE、HEC1A細(xì)胞系中的表達(dá)，RbAp48蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)用Western Blotting法，效率最高的一組則被選中做下一步實(shí)驗(yàn)。
　　4、在體外，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)用來觀察下調(diào)RbAp48表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌KLE、HEC1A細(xì)胞系功能的影響。
　　5、采用SPSS16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分析正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋

8、白的表達(dá)及子宮內(nèi)膜腺癌中RbAp48表達(dá)與臨床病理特性關(guān)系:Pearson卡方檢驗(yàn)或者Fisher精確檢驗(yàn);細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn):Student's T-test。數(shù)據(jù)來自至少三次的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，并均以mean±SD（均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:P＜0.05。
　　結(jié)果:
　　1、RbAp48蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織（增生期、分泌期、絕經(jīng)期）和子宮內(nèi)膜不典型增生組織中表達(dá)較低。RbAp48蛋白在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)高于正常

9、子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織，RbAp48蛋白在低分化腺癌的表達(dá)高于高分化腺癌和中分化腺癌。
　　2、數(shù)據(jù)分析表明:FIGO分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、孕激素服用史、肌層浸潤(rùn)深度以及肥胖、糖尿病與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋白的表達(dá)有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05);而年齡、月經(jīng)初潮、痛經(jīng)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙受累與其無關(guān)(P＞0.05)。
　　3、在體外，下調(diào)RbAp48表達(dá)后子宮內(nèi)膜腺癌KL