下調(diào)RbAp48表達抑制子宮內(nèi)膜腺癌細胞增殖、侵襲、遷移.pdf

1、研究背景:
　　子宮體癌常常被稱做子宮內(nèi)膜癌，可發(fā)生于任何年齡段，但以圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后中老年女性多見。典型表現(xiàn)多為:無明顯誘因出現(xiàn)經(jīng)期延長、經(jīng)量增多、絕經(jīng)后異常陰道流血或者分泌物增多，是女性常見的惡性生殖系統(tǒng)腫瘤之一。近幾年來，發(fā)病率逐年上升，嚴重威脅女性生命。子宮內(nèi)膜癌分很多亞型，如腺癌、漿液性乳頭狀癌、透明細胞癌以及未分化癌等，其最常見亞型是腺癌，約占發(fā)病率的80％-90％，與自然環(huán)境、家族遺傳、腹型肥胖、Ⅱ型糖尿病、絕經(jīng)晚、

2、初潮早、卵巢癌病史、不恰當使用雌/孕激素及不孕等多種因素相關。目前對早期病人治療方法主要是手術(shù)及化療、放療，病人5年生存率較高，而對晚期病人治療比較困難，多采用姑息治療，病人預后往往很差，5年生存率低。因此關于子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、新的治療途徑、治療靶點及靶向治療藥物的摸索仍在持續(xù)進行。
　　PcG（多梳蛋白polycomb group）蛋白是調(diào)控生長發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子，最早在果蠅中被發(fā)現(xiàn)，在物種間高度保守。PcG蛋白可以分為兩個

3、核心蛋白復合體:Polycomb抑制復合體1(PRC1)和Polycomb抑制復合體2(PRC2)。PRC1含有至少10個蛋白亞基，如RING1A/1B、BMI1; PRC2則由EZH2、RbAp48、SUZ12和EED四個蛋白亞基組成。
　　視網(wǎng)膜母細胞瘤結(jié)合蛋白48(Retinoblastoma associated protein-48，RbAp48)作為PRC2亞基中一個亞單位，是WD-40家族中的一員，在植物和動物中相對

4、保守，主要由CAF-1復合體、E(Z)復合體、NURF復合體、NuRD復合體、SIN3復合體、核蛋白等組成。近些年來，某些資料表明RbAp48在宮頸癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、惡性血液病、人獲得性免疫缺陷綜合征等多種惡性腫瘤中獲得廣泛研究并在其中承擔重要生物學作用。有研究表明:RbAp48主要功能是促進腫瘤細胞增殖、侵襲及遷移，但是其抑制腫瘤細胞侵襲、遷移及增殖能力也有相關報道。但是，目前關于RbAp48在子宮內(nèi)膜腺癌中的作用及其

5、發(fā)揮作用機制的研究尚未見相關報道。
　　研究目的:
　　本文旨在探討RbAp48在正常子宮內(nèi)膜組織（增生期、分泌期、絕經(jīng)期）、子宮內(nèi)膜不典型增生組織及不同分化程度的子宮內(nèi)膜腺癌組織（高、中、低分化）中的表達情況，是否有表達差異;分析子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48的表達與某些臨床病理特性的關系;進一步探討下調(diào)RbAp48表達對子宮內(nèi)膜腺癌KLE、HEC1A細胞系增殖、侵襲、遷移能力的影響，探求子宮內(nèi)膜腺癌治療的新型潛在分子靶點

6、，為下一步臨床治療打下堅實理論基礎。
　　研究方法:
　　1、采集合適的子宮內(nèi)膜組織標本，采用免疫組織化學法分析:72例正常子宮內(nèi)膜組織（增生期21例、分泌期27例、絕經(jīng)期24例），27例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，52例不同分化水平的子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋白的表達情況。
　　2、分析某些臨床病理特性與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48表達是否有相關性。
　　3、采取慢病毒來下調(diào)RbAp48基因在子宮內(nèi)膜腺癌K

7、LE、HEC1A細胞系中的表達，RbAp48蛋白表達情況的檢測用Western Blotting法，效率最高的一組則被選中做下一步實驗。
　　4、在體外，平板克隆形成實驗、CCK8實驗、Transwell侵襲及遷移實驗用來觀察下調(diào)RbAp48表達對子宮內(nèi)膜腺癌KLE、HEC1A細胞系功能的影響。
　　5、采用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。分析正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋

8、白的表達及子宮內(nèi)膜腺癌中RbAp48表達與臨床病理特性關系:Pearson卡方檢驗或者Fisher精確檢驗;細胞功能學實驗:Student's T-test。數(shù)據(jù)來自至少三次的獨立實驗，并均以mean±SD（均值±標準差）表示。差異有統(tǒng)計學意義:P＜0.05。
　　結(jié)果:
　　1、RbAp48蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織（增生期、分泌期、絕經(jīng)期）和子宮內(nèi)膜不典型增生組織中表達較低。RbAp48蛋白在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達高于正常

9、子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織，RbAp48蛋白在低分化腺癌的表達高于高分化腺癌和中分化腺癌。
　　2、數(shù)據(jù)分析表明:FIGO分期、遠處轉(zhuǎn)移、孕激素服用史、肌層浸潤深度以及肥胖、糖尿病與子宮內(nèi)膜腺癌組織中RbAp48蛋白的表達有關(P＜0.01，P＜0.05);而年齡、月經(jīng)初潮、痛經(jīng)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙受累與其無關(P＞0.05)。
　　3、在體外，下調(diào)RbAp48表達后子宮內(nèi)膜腺癌KL