丁酸鈉抑制人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、山東大學(xué)博士研究生論文丁酸鈉抑制人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其作用機(jī)制的研究丁酸鈉抑制人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其作用機(jī)制的研究論文I博士研究生專(zhuān)業(yè)博士生導(dǎo)師榮風(fēng)年婦科腫瘤湯春生教授中文摘要丁酸鈉對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HHUA生長(zhǎng)的影響目的探討丁酸鈉(NaB)對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HHUA細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法以不同濃度NaB處理體外培養(yǎng)的HHUA細(xì)胞1O72h，應(yīng)用形態(tài)學(xué)、DNA熒光染色、流式細(xì)胞儀、瓊脂糖凝膠電泳等方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布。結(jié)

2、果NaB能誘導(dǎo)HHUA細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期G1期阻滯。各種濃度的NaB處理細(xì)胞后24h，70％以上的細(xì)胞被阻滯在Gl期；以濃度為4mol／L和10mol／L處理后24h，出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞，瓊脂糖凝膠電泳顯示清晰的DNALadder，SubGl百分率隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)或藥物濃度增加而增高(P10mol／L)則引起細(xì)胞壞死。誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1期阻滯和細(xì)胞凋亡是NaB抑制HHUA細(xì)胞生長(zhǎng)的重要機(jī)制。關(guān)鍵詞丁酸鈉；子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系；細(xì)胞周期阻滯；細(xì)胞

3、凋亡山東大學(xué)博士研究生論文丁酸鈉抑制人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其作用機(jī)制的研究論文II丁酸鈉抑制HHUA細(xì)胞生長(zhǎng)的分子機(jī)制研究目的研究NaB誘導(dǎo)HHUA細(xì)胞G1期阻滯和細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法應(yīng)用不同濃度(Omol／L、2m01／L、4m01／L、10m01／L)的NaB處理體外培養(yǎng)的HHUA細(xì)胞，收集細(xì)胞、用RIPA緩沖液制備細(xì)胞抽提液。用WesternBlot分析測(cè)定p53、p21、pRb、E2F1、PCNA、Fas、Bax、Bcl2、

4、PARP、LaminB和caspase3蛋白的表達(dá)情況。研究Caspase3抑制劑AcDEVDCHO對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，先用AcDEVDCHO處理細(xì)胞2h再加入NaB，然后測(cè)定SubGl百分率、DNALadder、PARP蛋白表達(dá)情況。結(jié)果NaB能增加p21蛋白的表達(dá)、促進(jìn)pRb去磷酸化、降低p53蛋白和E2F1蛋白的表達(dá)。用終濃度為2mol／L的NaB處理細(xì)胞后lObp21蛋白表達(dá)水平增強(qiáng)、24hpRb去磷酸化、p53蛋白和E2FI蛋白

5、表達(dá)水平降低；4mol／L處理后24h能誘導(dǎo)Fas蛋白過(guò)度表達(dá)、激活caspase3、切割PARP和LaminB蛋白。Caspase一3抑制劑能降低85kDPARP蛋白的表達(dá)水平和SubGl百分率。結(jié)論NaB通過(guò)誘導(dǎo)p21蛋白過(guò)度表達(dá)及pRb去磷酸化，下調(diào)E2F1蛋白表達(dá)而誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1期阻滯。NaB誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與Fas蛋白過(guò)度表達(dá)及caspase3活化有關(guān)，而與p53蛋白、Bax蛋白、Bcl一2蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果提示NaB有