ERRγ介導(dǎo)雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖作用.pdf

1、目的：
　　 運(yùn)用RNAi技術(shù),將構(gòu)建的ERRγshRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入Ishikawa細(xì)胞,探討ERRγ沉默后對(duì)子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)特性及雌激素處理前后ERK的活化情況,初步闡明ERRγ在子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制中的作用以及與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系。
　　 方法：
　　 構(gòu)建含有ERRγshRNA的表達(dá)載體,用含有ERRγshRNA的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞,用RT-PCR方法觀察轉(zhuǎn)染前后子宮內(nèi)膜癌Ishika

2、wa細(xì)胞中ERRγMrna的表達(dá)情況;應(yīng)用免疫熒光、流式細(xì)胞技術(shù)及Westernblot方法分析下調(diào)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中ERRγ的對(duì)雌激素促增殖作用的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、RT-PCR分析了Ishikawa細(xì)胞中ERRγ表達(dá)情況,結(jié)果表明僅有ERRγ2表達(dá)。
　　 2、構(gòu)建針對(duì)ERRγ2shRNA序列,亞克隆到pRNAi-U6.1/Neo載體中,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,獲得穩(wěn)定的低表達(dá)ERRγ2的Ishi

3、kawa細(xì)胞。
　　 3、免疫熒光結(jié)果顯示:下調(diào)Ishikawa細(xì)胞中ERRγ2的表達(dá)可以明顯誘導(dǎo)lshikawa細(xì)胞發(fā)生凋亡,并且抑制了Ishikawa細(xì)胞對(duì)雌激素的反應(yīng)性。
　　 4、流式細(xì)胞技術(shù)顯示同樣的結(jié)果:未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組,雌激素作用前的細(xì)胞凋亡率為23.51%,雌激素作用后的細(xì)胞凋亡率為9.78%;ERRγshRNA細(xì)胞組,雌激素作用前的細(xì)胞凋亡率為11.68%,雌激素作用后的細(xì)胞凋亡率為13.73%。