重組人血管內(nèi)皮抑素體外對肝癌細胞生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文重組人血管內(nèi)皮抑素體外對肝癌細胞生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響姓名：張鵬海申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導(dǎo)教師：羅榮城20080415中文摘要和腫瘤生長，在臨床應(yīng)用于肺癌的治療中也取得令人鼓舞的療效。本課題擬將rh—Endostatin為主要實驗試劑，研究其體外對人肝癌細胞株HepG2Ft毛l高侵襲潛能人肝癌細胞株HCCLM6的增殖、細胞周期、細胞凋亡以及細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，并試圖探討其作用機制。以完善rhEndo

2、statin抗腫瘤機制，了解rhEndostatin在肝癌治療中的應(yīng)用可能，為其臨床應(yīng)用提供進一步的理論依據(jù)。第一章重組人血管內(nèi)皮抑素體外對肝癌細胞增殖、周期與凋亡的影響一、材料與方法1將貼壁培養(yǎng)的HCCLM6及HepG2細胞消化收集計數(shù)后，分別加入整合素a5131抗體和FITC一羊抗小鼠lgG二抗，同時設(shè)陰性對照組；采用免疫熒光法，用流式細胞儀定量檢測兩細胞株表面整合素a5131的表達率。2分別將HCCLM6及HepG2細胞接種于共聚

3、焦測試平皿中，待細胞完全貼壁后，4％多聚甲醛固定，加入整合素a5131抗體和FITC一羊抗小鼠IgGZ抗，并加入Hochest33258染液進行細胞核負染；于激光共聚焦熒光顯微鏡下拍照觀察，檢測rhEndostatin作用受體整合素a5131在兩種細胞的定性定位表達。3分別將rh—Endostatin或BSA包被96孔酶標板中，實驗設(shè)單純包被BSA組、單純包被rhEndostatin組和包被rhEndostatinAntia5131干擾

4、組，分別將無血清DMEM懸浮的HCCLM6及HepG2細胞接種到每孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，去除未粘著的細胞后，MTT法、酶標儀檢測粘著細胞的OD值，進行分析比較，檢測兩種細胞是否通過整合素a5131介導(dǎo)與rhEndostatin間結(jié)合及其程度。4分別以終濃度為0、50、100、200和400I_tg／mlrhEndostatin處理HCCLM6及HepG2細胞，MTT法檢測處理24、48及72h后吸光值OD值，檢測并分析rhEndostati