2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、目的：
　　 本研究采用含H1啟動子的載體pGPU6/GFP/Neo，針對IRAK1基因的短發(fā)夾結構RNA（shRNA）構建靶向IRAK1基因特異性shRNA真核表達載體，為今后體外或體內(nèi)研IRAK1基因在中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性損傷后的功能修復提供一種有效方法。
　　 方法：
　　 根據(jù)pGPU6/GFP/Neo中H1啟動子啟動表達siRNA對序列的要求，利用Ambion公司在線siRNA Target find

2、er軟件（http：//www.ambion.com/techlib/misc/siRNA finder.html）設計合成shRNA序列。在PCR儀上按照如下程序進行shRNA模板的退火處理：95℃ 5 min，85℃ 5 min，75℃ 5 min，70℃ 5 min，4℃保存。經(jīng)酶切處理，pGPU6/GFP/Neo載體的線性化及其構建。所得質粒用BamH I、Pst I分別酶切鑒定并測序。
　　 結果：
　　 成功

3、構建shRNA真核表達載體模式。pGPU6/GFP/Neo分別為含抗性篩選標記Neomycin同時可以表達GFP蛋白的RNAi載體，Kanamycin/Neo分別代表卡那抗性和新霉素抗性。pGPU6/GFP/Neo質粒載體用BamH I，Pst I分別酶切電泳鑒定，結果表明，所有質粒均為陽性重組載體，即所設計的shRNA干擾片段確已插入到RNAi載體中。每組選擇兩個克隆進行測序鑒定，測序鑒定結果重組質粒編碼序列插入位置正確，無基因突變，

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