兔急性高眼壓模型中視神經(jīng)軸漿運輸及細胞骨架的研究.pdf

1、目的:研究不同眼壓的兔急性高眼壓模型中,視神經(jīng)軸漿運輸及細胞骨架的改變情況。
　　 方法:成年新西蘭大白兔24只,分成4組(20mmHg組,30mmHg組,40mmHg組,對照組),每組6只。每只兔我們均行動脈插管來監(jiān)測血壓及動脈氧分壓,靜脈插管來維持持續(xù)麻醉狀態(tài)及調(diào)整血壓,氣管插管來維持通氣量,以此來建立兔穩(wěn)定的生理狀態(tài)。隨后對于每只兔的左眼采用前房穿刺灌注法聯(lián)合壓力持續(xù)監(jiān)測法,通過壓力監(jiān)測設備(包括壓力換能器、生物信號處理系

2、統(tǒng)、輸出設備)的應用,制造精確、穩(wěn)定、持續(xù)的急性高眼壓模型。在建立了穩(wěn)定的高眼壓模型后,開始對于軸漿運輸及細胞骨架進行相關(guān)研究。實驗開始時,在兔眼的玻璃體腔中注射Rhodamine-b-isothiocyanate(RITC)用以觀察軸漿運輸。持續(xù)3小時高眼壓后,過量麻醉處死兔后,迅速取下眼球,使視神經(jīng)保持在4-6mm,連同篩板、乳頭前視網(wǎng)膜取下視神經(jīng)。通過NFHp、NFH、NFM等細胞骨架蛋白的免疫組化染色用以研究細胞骨架的改變。應用

3、熒光顯微鏡及共聚焦顯微鏡對視神經(jīng)軸漿運輸及細胞骨架的形態(tài)改變進行觀察。最后通過灰度分析及SPSS11.5軟件統(tǒng)計兩部分改變的情況以及兩者和眼壓的關(guān)系。
　　 結(jié)果:通過壓力監(jiān)測設備的應用,各眼壓值均能精確穩(wěn)定地維持在預先設定的眼壓值范圍內(nèi)。40mmHg組:40.4965±0.703458mmng、30mmHg組:31.01522±0.920309mmHg、20mmHg組:20.52157±0.412226mmHg、對照組:11.

4、91016±1.671357mmHg。
　　 通過持續(xù)監(jiān)測及適時補液,血壓平均維持在52～78mmHg,脈壓差26mmHg。
　　 視神經(jīng)軸漿運輸染色結(jié)果:紅色的RITC染料在視神經(jīng)中心呈順行標染,但隨著離視網(wǎng)膜的距離越遠,紅色標記越淡。不同眼壓組別中,其軸漿運輸受障礙的情況不同。隨著眼壓升高,其軸漿運輸能力減弱(P＜0.05)。篩板不同部位中,各眼壓組別的軸漿運輸受障礙情況不同。篩板前區(qū),各眼壓組間無差別(P＞0.05

5、),篩板區(qū),各眼壓組間有差異,30mmHg組及40mmHg組與對照組有顯著性差異(P＜0.05),20mmHg組與對照組無差異(P＞0.05)。篩板后350μm,30mmHg組及40mmHg組與對照組有顯著性差異(P＜0.05),20mmHg組與對照組無差異(P＞0.05)。
　　 視神經(jīng)細胞骨架研究結(jié)果:NFH組中,不同眼壓組別中神經(jīng)絲染色不同。40mmHg組呈現(xiàn)明顯的低熒光,30mmHg組中心部分神經(jīng)絲缺失,20mmHg組與

6、對照組在熒光及神經(jīng)絲數(shù)量上無明顯差異。NFM及NFHp組呈現(xiàn)相同結(jié)果。通過灰度比值(高眼壓灰度/對照組灰度),經(jīng)One-way ANOVA統(tǒng)計后,發(fā)現(xiàn)各神經(jīng)絲蛋白組,各眼壓組別之間,并無顯著的統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:30mmHg以上的兔高眼壓模型持續(xù)3小時將導致視神經(jīng)軸漿運輸?shù)母淖?且軸漿運輸?shù)恼系K部位以篩板區(qū)和篩板后區(qū)350μm區(qū)域為主。而30mmHg及40mmHg高眼壓持續(xù)3小時所致的細胞骨架改變并不明顯。30mmHg及4