脂欣康干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊及平滑肌細(xì)胞泡沫化的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討脂欣康干預(yù)載脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠動(dòng)脈粥樣硬化(As)易損斑塊及平滑肌細(xì)胞泡沫化的分子作用機(jī)制,為脂欣康的進(jìn)一步深入開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù);探討脂欣康作為擬過(guò)氧化物酶體增殖因子激活受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑的可能性,發(fā)現(xiàn)新的中藥治療As靶點(diǎn),拓寬中醫(yī)藥抗As的研究與應(yīng)用思路。方法:通過(guò)對(duì)脂欣康初步基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用研究的整理分析,結(jié)合中西醫(yī)研究的最新進(jìn)展,對(duì)As易損斑塊病機(jī)進(jìn)行探討。1.整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)6周

2、齡ApoE(-/-)小鼠100只隨機(jī)分為5組(A-E),每組20只。6周齡具有相同遺傳背景的C57BL/6J鼠20只,為C57BL/6J鼠對(duì)照組(F)。分組如下:A脂欣康組,B血脂康組,C洛伐他汀,D羅格列酮組,E模型組,F正常對(duì)照組。A-E各組分別給予脂欣康、血脂康、洛伐他汀、羅格列酮、生理鹽水灌胃,F組給予生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃給藥后12周,腹腔麻醉后下腔靜脈取血檢測(cè)血脂水平(TG、TC、LDL-C、HDL-C、VLDL),酶聯(lián)免疫

3、吸附法(ELISA)檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等炎癥因子;取主動(dòng)脈,用光鏡、電鏡觀察ApoE(-/-)小鼠主動(dòng)脈As病變形態(tài),免疫組化法分別檢測(cè)PPARγ、腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)蛋白表達(dá)。2.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)在SD大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)原代培養(yǎng)、傳代及鑒定成功的基礎(chǔ)上,加入ox-LDL使其泡沫化,分為:A脂欣康組,B血脂康組,C洛伐他汀,D羅格列酮組,E生理鹽水組,分別加入

4、脂欣康含藥血清、血脂康含藥血清、洛伐他汀含藥血清、羅格列酮含藥血清、生理鹽水含藥血清,并設(shè)F組為不加含藥血清的空白對(duì)照組。采用高效液相色譜檢測(cè)VSMC內(nèi)膽固醇及膽固醇酯含量,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)培養(yǎng)平滑肌源性泡沫細(xì)胞內(nèi)Ca2+,原位雜交檢測(cè)B類(lèi)清道夫受體CD36 mRNA表達(dá)。結(jié)果:1.提出了動(dòng)脈粥樣硬化及其易損斑塊的氣虛血瘀,毒損脈絡(luò)病機(jī),和益氣活血解毒治則的新思路,探討了體現(xiàn)這一治則的脂欣康膠囊的中醫(yī)藥理論基礎(chǔ),整理分析了脂欣康在調(diào)

5、脂、抗As、防治急性冠脈綜合征等方面的基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用研究。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)脂欣康能夠調(diào)節(jié)ApoE(-/-)小鼠的血脂水平;(2)脂欣康能顯著降低ApoE(-/-)小鼠血清TNF-α和IL-1β等炎癥因子的水平;(3)脂欣康具有升高ApoE(-/-)小鼠主動(dòng)脈的PPARγ與ABCA1的作用,與羅格列酮有相似的PPARγ激動(dòng)作用,并且優(yōu)于后者;(4)脂欣康具有與洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫細(xì)胞內(nèi)CD36 mRNA表達(dá)的作用,并且優(yōu)于

6、洛伐他汀;(5)脂欣康可顯著降低平滑肌源性泡沫細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度,優(yōu)于洛伐他汀及血脂康;(6)脂欣康能抑制VSMC泡沫化、抗SMC增殖、抗As斑塊形成,保護(hù)主動(dòng)脈的形態(tài)結(jié)構(gòu)特別是超微結(jié)構(gòu),穩(wěn)定斑塊。結(jié)論:脂欣康能夠通過(guò)PPARγ活化,從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)下游靶基因CD36、ABCA1的表達(dá)及相關(guān)炎癥因子TNF-α和IL-1β等的釋放,從而抑制平滑肌源性泡沫細(xì)胞形成,阻斷As的進(jìn)程。脂欣康有望成為中醫(yī)藥領(lǐng)域中新的、特異性較高的PPARγ激動(dòng)劑