脂欣康干預動脈粥樣硬化易損斑塊及平滑肌細胞泡沫化的分子機制研究.pdf

1、目的:探討脂欣康干預載脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠動脈粥樣硬化(As)易損斑塊及平滑肌細胞泡沫化的分子作用機制,為脂欣康的進一步深入開發(fā)及臨床應用提供科學依據(jù);探討脂欣康作為擬過氧化物酶體增殖因子激活受體γ(PPARγ)激動劑的可能性,發(fā)現(xiàn)新的中藥治療As靶點,拓寬中醫(yī)藥抗As的研究與應用思路。方法:通過對脂欣康初步基礎研究和臨床應用研究的整理分析,結合中西醫(yī)研究的最新進展,對As易損斑塊病機進行探討。1.整體動物實驗6周

2、齡ApoE(-/-)小鼠100只隨機分為5組(A-E),每組20只。6周齡具有相同遺傳背景的C57BL/6J鼠20只,為C57BL/6J鼠對照組(F)。分組如下:A脂欣康組,B血脂康組,C洛伐他汀,D羅格列酮組,E模型組,F正常對照組。A-E各組分別給予脂欣康、血脂康、洛伐他汀、羅格列酮、生理鹽水灌胃,F組給予生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃給藥后12周,腹腔麻醉后下腔靜脈取血檢測血脂水平(TG、TC、LDL-C、HDL-C、VLDL),酶聯(lián)免疫

3、吸附法(ELISA)檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等炎癥因子;取主動脈,用光鏡、電鏡觀察ApoE(-/-)小鼠主動脈As病變形態(tài),免疫組化法分別檢測PPARγ、腺苷三磷酸結合盒轉運體A1(ABCA1)蛋白表達。2.體外細胞實驗在SD大鼠主動脈血管平滑肌細胞(VSMC)原代培養(yǎng)、傳代及鑒定成功的基礎上,加入ox-LDL使其泡沫化,分為:A脂欣康組,B血脂康組,C洛伐他汀,D羅格列酮組,E生理鹽水組,分別加入

4、脂欣康含藥血清、血脂康含藥血清、洛伐他汀含藥血清、羅格列酮含藥血清、生理鹽水含藥血清,并設F組為不加含藥血清的空白對照組。采用高效液相色譜檢測VSMC內(nèi)膽固醇及膽固醇酯含量,激光共聚焦顯微鏡檢測培養(yǎng)平滑肌源性泡沫細胞內(nèi)Ca2+,原位雜交檢測B類清道夫受體CD36 mRNA表達。結果:1.提出了動脈粥樣硬化及其易損斑塊的氣虛血瘀,毒損脈絡病機,和益氣活血解毒治則的新思路,探討了體現(xiàn)這一治則的脂欣康膠囊的中醫(yī)藥理論基礎,整理分析了脂欣康在調(diào)

5、脂、抗As、防治急性冠脈綜合征等方面的基礎與臨床應用研究。2.實驗結果:(1)脂欣康能夠調(diào)節(jié)ApoE(-/-)小鼠的血脂水平;(2)脂欣康能顯著降低ApoE(-/-)小鼠血清TNF-α和IL-1β等炎癥因子的水平;(3)脂欣康具有升高ApoE(-/-)小鼠主動脈的PPARγ與ABCA1的作用,與羅格列酮有相似的PPARγ激動作用,并且優(yōu)于后者;(4)脂欣康具有與洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫細胞內(nèi)CD36 mRNA表達的作用,并且優(yōu)于

6、洛伐他汀;(5)脂欣康可顯著降低平滑肌源性泡沫細胞內(nèi)的Ca2+濃度,優(yōu)于洛伐他汀及血脂康;(6)脂欣康能抑制VSMC泡沫化、抗SMC增殖、抗As斑塊形成,保護主動脈的形態(tài)結構特別是超微結構,穩(wěn)定斑塊。結論:脂欣康能夠通過PPARγ活化,從轉錄水平調(diào)節(jié)下游靶基因CD36、ABCA1的表達及相關炎癥因子TNF-α和IL-1β等的釋放,從而抑制平滑肌源性泡沫細胞形成,阻斷As的進程。脂欣康有望成為中醫(yī)藥領域中新的、特異性較高的PPARγ激動劑