胃癌血管特異性短肽GEBP11受體信息的初步篩選.pdf

1、【背景】
　　腫瘤的血管生成與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有著密切的聯(lián)系。對(duì)腫瘤血管生成的研究為腫瘤的診斷和治療提供了新的策略和良好前景。然而，由于缺乏腫瘤血管靶向性分子，通過(guò)腫瘤血管診斷治療腫瘤尚未取得令人滿意的結(jié)果。研究證實(shí)，在腫瘤微環(huán)境的作用下腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的遺傳組成受到影響，表達(dá)異質(zhì)性分子[1,2]。異質(zhì)性分子的存在將為腫瘤的靶向診斷及治療提供特異性靶標(biāo)。腫瘤血管的異質(zhì)性取決于腫瘤的異質(zhì)性，由腫瘤的類型及微環(huán)境決定[3,

2、4]。胃癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外共培養(yǎng)可以模擬腫瘤微環(huán)境，誘導(dǎo)胃癌血管異質(zhì)性分子的表達(dá)。前期工作中，我們通過(guò)建立胃癌細(xì)胞SGC7901和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型，利用噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫(kù)體外篩選獲得能特異結(jié)合于共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞的短肽GEBP11。通過(guò)初步鑒定證實(shí)，GEBP11具有良好的胃癌血管靶向性[5]和血管生成抑制活性。篩選GEBP11的結(jié)合受體對(duì)深入研究GEBP11實(shí)現(xiàn)靶向性和血管抑制活性的機(jī)制具有重要意義。因此，本課題圍繞

3、篩選GEBP11結(jié)合受體的相關(guān)信息展開研究，旨在為獲得GEBP11的結(jié)合受體奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　【目的】
　　1.獲得GEBP11結(jié)合受體在多種胃癌細(xì)胞系、多種正常組織和多種器官腫瘤組織血管的表達(dá)分布信息；
　　2.研究GEBP11干預(yù)后Co-HUVECs分子群的表達(dá)變化，鑒定GEBP11影響的信號(hào)通路，為受體篩選提供參考信息；
　　3.篩選GEBP11的結(jié)合受體，為闡明GEBP11的機(jī)制和功能奠定基礎(chǔ)。

4、>　　【方法】
　　1.通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)GEBP11在多種正常組織、多器官腫瘤組織血管上的結(jié)合特性，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法檢測(cè)GEBP11在不同胃癌細(xì)胞系上的結(jié)合特性；
　　2.通過(guò)RT-PCR和Westernblot對(duì)基因表達(dá)譜分析的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)基因表達(dá)譜分析的結(jié)果進(jìn)行深入的生物信息學(xué)分析，鑒定GEBP11影響的信號(hào)通路；
　　3.通過(guò)免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法初步篩選GEBP11的受體。

5、>　　【結(jié)果】
　　1.GEBP11受體的分布信息
　　1)GEBP11結(jié)合受體在多種細(xì)胞系上的表達(dá)分布
　　免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，GEBP11在Co-HUVECs和MKN45染色呈陽(yáng)性，在GES染色弱陽(yáng)性，在MKN28、AGS、SGC7901染色呈陰性；URP、PBS對(duì)照在各細(xì)胞系染色均呈陰性。
　　2)GEBP11的結(jié)合受體在多種器官腫瘤中的表達(dá)分布
　　GEBP11在多器官腫瘤組織的免疫化學(xué)染色顯

6、示，GEBP11的結(jié)合受體在胃癌、胰腺癌組織血管呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；在食管癌、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞肝癌、子宮癌組織血管呈弱陽(yáng)性表達(dá)；在直腸癌、肺癌、膀胱癌組織血管呈陰性表達(dá)。上述9種腫瘤對(duì)應(yīng)的癌旁組織中，GEBP11的結(jié)合受體在子宮癌和膀胱癌的癌旁組織血管呈陽(yáng)性表達(dá)；其余均為陰性表達(dá)。GEBP11的結(jié)合受體在肝細(xì)胞肝癌、膀胱尿路上皮癌組織呈陽(yáng)性表達(dá)，在慢性結(jié)腸粘膜炎和慢性直腸粘膜炎的腺體、腎組織、膀胱粘膜等癌旁組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，在其余腫瘤和癌旁組織

7、實(shí)質(zhì)呈陰性表達(dá)。
　　3)GEBP11的結(jié)合受體在正常組織中的表達(dá)分布
　　GEBP11在食管、肝、胰腺、垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、心肌、肺、腎、胸腺、骨髓、脾臟、乳腺、卵巢、扁桃體、睪丸、前列腺、涎腺、胃、小腸、結(jié)腸等各種正常組織血管染色均為陰性，在食管粘膜細(xì)胞、胃腺體、結(jié)腸腺體、腎小管、睪丸實(shí)質(zhì)染色陽(yáng)性。
　　2.GEBP11干預(yù)后Co-HUVECs表達(dá)變化的分子群和影響的信號(hào)通路
　　經(jīng)驗(yàn)證，RT-PCR與W

8、esternblot的結(jié)果與基因表達(dá)譜一致；差異基因篩選、GoTerm和Pathway分析為GEBP11結(jié)合受體的篩選提供了信息。
　　3.GEBP11受體的篩選
　　通過(guò)免疫沉淀-質(zhì)譜分析的方法篩選獲得了12個(gè)GEBP11結(jié)合受體的候選分子；通過(guò)與基因表達(dá)譜結(jié)果結(jié)合分析發(fā)現(xiàn)候選蛋白ZCCHC11經(jīng)GEBP11處理后表達(dá)上調(diào)約3倍。
　　【結(jié)論】
　　1.GEBP11的受體表達(dá)于一些低分化胃癌細(xì)胞系和某些腫瘤組織