調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對哮喘小鼠氣道炎癥IL-12、IgE分泌的影響.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)是已知的體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cells，APC)，它可以活化T細(xì)胞，啟動(dòng)免疫應(yīng)答，還可以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的反應(yīng)強(qiáng)度，誘導(dǎo)免疫耐受。我們前期的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在肺臟基質(zhì)細(xì)胞的微環(huán)境中，成熟樹突狀細(xì)胞(mature dendritic cells，mDC)可被誘導(dǎo)為一種免疫表型為CD11clowIalowCD11bhigh的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞(DCreg，r

2、DC)。這種rDC缺乏活化T細(xì)胞的重要信號(hào)(Ia、IL-12p70)，但高分泌可以抑制未成熟DC發(fā)育成熟的Th2型細(xì)胞因子IL-10。而且我們發(fā)現(xiàn)，通過MTT檢測，相對于mDC組，這種DCreg誘導(dǎo)同種異體T細(xì)胞的增殖能力明顯降低。結(jié)合以上DCreg的表型、細(xì)胞因子分泌及功能特點(diǎn)，我們推測這種DCreg可以誘導(dǎo)免疫耐受。支氣管哮喘是一種常見的呼吸系統(tǒng)慢性炎性疾病，它由多種細(xì)胞組分(包括嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等)及

3、其炎癥相關(guān)因子參與。其發(fā)病機(jī)制與效應(yīng)性T(CD4+T)細(xì)胞活化，并分泌多種細(xì)胞因子，導(dǎo)致Th1型和Th2型細(xì)胞因子失衡有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這種DCreg對哮喘小鼠氣道炎癥的緩解作用及對IL-12、IgE分泌的影響。我們的研究證明，經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的DCreg對哮喘小鼠氣道炎癥有治療的作用，DCreg應(yīng)用于哮喘治療具有良好的前景。
　　 目的：觀察體外培養(yǎng)的DCreg能否在體內(nèi)發(fā)揮緩解哮喘小鼠炎癥的作用及對IL-12、IgE分泌的影響，并

4、探討其緩解炎癥的可能機(jī)制。
　　 方法：第一部分，調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞(DCreg)的獲得。用體外培養(yǎng)的小鼠肺臟基質(zhì)細(xì)胞(MPSC)的上清液來模擬體內(nèi)的肺臟基質(zhì)微環(huán)境。用小鼠重組細(xì)胞因子白介素-4(rmIL-4)、重組巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)，誘導(dǎo)骨髓造血干細(xì)胞(HSC)向DC分化，并用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)其成熟，模擬體內(nèi)的mDC群。將mDC與MPSC上清液共培養(yǎng)一周后，得到一種新型的DC亞群，流式細(xì)胞儀檢測發(fā)

5、現(xiàn)這是一群表型穩(wěn)定在CD11clowCDIalowCD11bhigh的調(diào)節(jié)性DC。第二部分，調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對哮喘小鼠氣道炎癥及IL-12、IgE分泌的影響。除正常組小鼠外，其余各組均誘導(dǎo)哮喘樣癥狀。經(jīng)卵白蛋白(OVA)的初次致敏、加強(qiáng)致敏及霧化攻擊后，如果小鼠出現(xiàn)呼吸深快，活動(dòng)減少，頭面部瘙癢，背部弓起、抬高，二便失禁為陽性反應(yīng)，表明哮喘模型建立成功。動(dòng)物分組及rDC的免疫如下：將40只C57小鼠隨機(jī)分成四組，每組10只。第一組：正常

6、組，分別在Day0、Day7、Day14，按100μl/只的量腹腔注射磷酸鹽緩沖液(PBS)。第二組：mDC組，分別在Day0、Day7、Day14，按5×106/鼠的細(xì)胞量腹腔注射mDC。第三組：rDC組，分別在Day0、Day7、Day14，按5×106/鼠的細(xì)胞量腹腔注射rDC。第四組：OVA組，未做處理的哮喘組。末次激發(fā)的24h后，經(jīng)小鼠眼球采血。利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測定血清的IL-12及IgE水平。常規(guī)留取小鼠

7、右肺中葉，經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后行病理學(xué)觀察。利用ELISA法測定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的分泌水平。并對BALF行白細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞分為巨噬細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，中性粒和嗜酸性粒細(xì)胞。
　　 結(jié)果：通過研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)回輸調(diào)節(jié)性DC能有效地抑制小鼠肺泡灌洗液和肺實(shí)質(zhì)中的中性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤，BALF和血清中IL-12的分泌均增多，血清IgE分泌下降。而回輸成熟DC的小鼠上述指標(biāo)與OVA組小鼠無明顯差異。<