髓系來源抑制細(xì)胞在慢性乙型肝炎中的免疫抑制作用.pdf

1、目的：一般認(rèn)為病毒持續(xù)性感染與機(jī)體的免疫功能低下有關(guān)。有報(bào)道稱慢性乙型肝炎病程遷延不愈與患者外周血、肝臟組織中調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(regulatory T cells, Treg)介導(dǎo)的免疫抑制功能有關(guān)。最近,大量研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤、炎癥等病理情況下,骨髓產(chǎn)生的髓系來源抑制細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC)群體異常增多,具有強(qiáng)大的、廣泛的免疫抑制功能,并且還能誘導(dǎo)Treg的產(chǎn)生。然而,在慢性乙型肝

2、炎病理過程中,該群細(xì)胞是否募集增多、是否介導(dǎo)機(jī)體免疫抑制狀態(tài)等問題尚未見報(bào)道。為此,我們收集了60例慢性乙型肝炎病例,對(duì)外周血中CD33+CD11b+HLA-DR-MDSC的數(shù)量、免疫抑制功能及其與患者肝功能、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)復(fù)制相關(guān)的臨床指標(biāo)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,期望為慢性乙型肝炎的臨床治療提供新的理論依據(jù)和線索。
　　方法：本研究以慢性乙型肝炎病例(CHB)為研究對(duì)象,收集臨床病例資料,采

3、集其外周血,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其外周血中CD33+CD11b+HLA-DR-MDSC百分比,并將其與患者肝功能及HBV復(fù)制相關(guān)臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析;ELISA法檢測(cè)患者血清中促炎因子TNF-α的含量,并分析病例MDSC百分比與TNF-α含量的相關(guān)關(guān)系。瑞氏-吉姆薩染色后,觀察從CHB外周血中分離純化的MDSC形態(tài);然后,用免疫磁珠法分離、純化病例外周血中MDSC,用抗CD3單抗刺激病例T細(xì)胞,體外混合培養(yǎng)觀察MDSC對(duì)自身T細(xì)胞增殖的

4、抑制作用;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CHB外周血MDSC細(xì)胞內(nèi)TGF-β和IL-10的表達(dá);同時(shí),用RT-PCR方法檢測(cè)CHB與健康者PBMC中ARG1和iNOS的mRNA水平。
　　結(jié)果：CHB病例外周血中MDSC百分比較健康者顯著升高(P=0.0001),并且CHB重度和重型組中,其MDSC百分比顯著高于輕度和中度組(P<0.05);病例 MDSC百分比與肝臟損害程度相關(guān)指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,A

5、LT)及總膽紅素(total bilirubin, TBIL)呈正相關(guān),與凝血酶原活動(dòng)度(prothrombin activity,PTA)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),但與其病毒的拷貝數(shù)高低、e抗原表達(dá)與否不相關(guān)。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)促炎因子TNF-α在CHB重度患者血清中含量增多(P<0.05),并且TNF-α含量與自身MDSC百分比也呈明顯正相關(guān)(P<0.05)。瑞氏-吉姆薩染色鏡檢顯示病例中純化的MDSC呈現(xiàn)典型的單核細(xì)胞形態(tài)。將從病例外周血

6、中純化的MDSC與其自身T細(xì)胞混合培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)MDSC能明顯抑制抗CD3單抗刺激的T細(xì)胞增殖,使CD4+T細(xì)胞增殖率從69.8％下降到56.7％,使CD8+T細(xì)胞增殖率從78.2％下降到66.3％;CHB病例組MDSC胞內(nèi)產(chǎn)生的TGF-β明顯高于健康者組(P<0.05),而IL-10的產(chǎn)生無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;CHB病例組ARG1在mRNA水平的表達(dá)要稍高于健康者組,但未見iNOS mRNA水平增高。
　　結(jié)論：CHB病例外周血中CD33+C