半乳糖受體介導的MAP30對乙型肝炎病毒抑制作用的實驗研究.pdf

1、乙型肝炎病毒是嗜肝雙鏈DNA病毒,病毒外膜與肝細胞膜融合進入細胞內(nèi),病毒基因組的復制過程需要經(jīng)過共價閉合環(huán)狀DNA(covalently close circular DNA,ccc DNA)轉錄為前基因組RNA和若干種mRNA、前基因組RNA反轉錄負鏈DNA、以負鏈DNA為模板復制正鏈DNA、雙鏈DNA轉變?yōu)槌墒靋ccDNA等幾個生物合成階段.MAP30(momordica anti-HIV protein of 30kD,MAP30

2、)是從葫蘆科植物苦瓜種子中純化的一種單鏈核糖體失活蛋白.該課題根據(jù)肝實質細胞膜上存在有能專一識別和結合半乳糖基的特異性無唾液酸蛋白受體(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)這一特性,設想通過制備了Gal-ABH-MAP30交聯(lián)物,將MAP30特異性地導入肝細胞,并進一步深入研究其體內(nèi)外抗HBV的活性.首先采用光化學法,以雙功能的交聯(lián)劑ABH(p-azidobenzoyl hydrazide,交聯(lián)劑)橋

3、梁,依次將半乳糖(galactose,Gal)和MAP30交聯(lián),構建了Gal-ABH-MAP30交聯(lián)物,經(jīng)紫外掃描對照鑒定,證明Gal-ABH-MAP30中Gal-ABH是化學偶聯(lián).交聯(lián)率達86.2﹪.用氯胺T法將<'125>I標記MAP30及Gal-ABH-MAP30,放射性示蹤觀察<'125>I-Gal-ABH-MAP30/<'125>I-MAP30在小鼠體內(nèi)的生物分布特性,顯示<'125>I-Gal-ABH-MAP30的肝濃聚水平

4、及速度遠遠大于<'125>I-MAP30,<'125>I-Gal-ABH-MAP30在血液中的分布遠小于<'125>I-MAP30,且具有肝靶向藥物在血液中的再分布特點.將Gal-ABH-MAP30及MAP30,分別加入2.2.15細胞培養(yǎng)液,結果表明,Gal-ABH-MAP30及MAP30對2.2.15細胞HBeAg的表達及HBV DNA合成均有抑制作用,其中Gal-ABH-MAP30作用強,發(fā)生最大效應的時間也較早.將半乳糖介導的藥