高銅飼料對(duì)鴨乙型肝炎病毒的作用.pdf

1、背景及目的：在長(zhǎng)期的臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)肝豆?fàn)詈俗冃院苌俸喜⒁倚透窝撞《靖腥?，肝豆?fàn)詈俗冃曰颊吒腥疽倚透窝撞《镜臋C(jī)率明顯低于一般人群。肝豆?fàn)詈俗冃缘牟±砘A(chǔ)是銅過(guò)量。過(guò)量的銅誘導(dǎo)氧自由基產(chǎn)生，可以導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，引起生物膜和生物大分子的損害。銅在細(xì)胞核內(nèi)的聚積可破壞DNA聚合酶的活性，使核酸鏈斷裂，堿基氧化。核內(nèi)銅與DNA結(jié)合還可促進(jìn)局部羥自由基產(chǎn)生，加重DNA的損傷。因此，肝豆?fàn)詈俗冃圆∪穗y以感染乙型肝炎的機(jī)理可能是：肝豆?fàn)詈俗冃砸?/p>

2、的肝細(xì)胞銅含量增高可能對(duì)HBV的吸附、穿透、轉(zhuǎn)錄、復(fù)制等一種或多種過(guò)程有嚴(yán)重影響。因此我們提出：提高肝銅含量是否可以對(duì)抗HBV感染呢? 鴨乙型肝炎病毒(DHBV)屬于嗜肝DNA病毒科，其形態(tài)結(jié)構(gòu)、核酸組成、生物學(xué)特性以及發(fā)病機(jī)理等方面與乙型肝炎病毒(HBV)相似，是研究HBV分子生物學(xué)、發(fā)病機(jī)理及抗HBV藥物最常用的動(dòng)物模型。 但是，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)沒(méi)有現(xiàn)成鴨乙型肝炎感染動(dòng)物模型供應(yīng)；長(zhǎng)沙地區(qū)尚無(wú)鴨乙型肝炎病毒感染資料；鴨乙型肝

3、炎病毒檢測(cè)目前常用的方法為同位素標(biāo)記斑點(diǎn)雜交。為了探討肝銅含量增加對(duì)嗜肝DNA病毒的影響，我們進(jìn)行了這一研究。 方法：1、建立常規(guī)PCR檢測(cè)鴨乙肝病毒DNA的方法，檢查長(zhǎng)沙地區(qū)麻鴨DHBV的感染率。2、建立SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)DHBVDNA的方法，并與常規(guī)PCR進(jìn)行比較。3、構(gòu)建插入DHBVDNA片段的重組質(zhì)粒，作為DHBVDNA含量檢測(cè)的定量標(biāo)準(zhǔn)。4、初步探討硫酸銅飼養(yǎng)對(duì)麻鴨的毒性、能否在鴨肝內(nèi)蓄積并抑制鴨乙

4、肝病毒。 結(jié)論：1.首次報(bào)道了長(zhǎng)沙地區(qū)麻鴨DHBV的感染率。長(zhǎng)沙地區(qū)麻鴨DHBV自染攜帶病毒率較高，是較為理想的HBV的動(dòng)物模型。2.成功地構(gòu)建DHBVDNA重組質(zhì)粒，可以作為定量PCR檢測(cè)的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。3.國(guó)內(nèi)首次建立SYBR熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)鴨DHBVDNA新方法。SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)鴨乙肝病毒的方法簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，敏感性和特異性?xún)?yōu)于常規(guī)PCR法。4.大劑量硫酸銅對(duì)雛鴨毒性很大。5.較小劑量硫酸銅對(duì)成年麻鴨無(wú)明