海灘牽牛有效單體聯(lián)用效應(yīng)分析和抗炎機制研究.pdf

1、風(fēng)濕病(Rheumatism)是一組侵犯關(guān)節(jié)、骨骼、肌肉、血管及有關(guān)軟組織或結(jié)締組織為主的疾病，其中多數(shù)為自身免疫性疾病。潮汕地區(qū)中草藥海灘牽牛，俗稱白花馬鞍藤，拉丁名：Ipomoea stolonifera(Ipomoea imperati(Vahl))(IS)，人們用它祛濕通絡(luò)，治療風(fēng)濕病，特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，有著悠長的歷史和顯著的療效，民間常用來治療炎癥相關(guān)疾病。因此，對IS有效部位各單體抗炎作用以及各單體聯(lián)用效應(yīng)和機制的分析，

2、為其臨床療效提供理論依據(jù)是十分有意義的。
　　本課題組前期研究，通過各種整體模型證明IS有效部位(EFIS)對急、慢性炎癥均有良好的抗炎作用；通過檢測巴豆油致小鼠耳腫脹部位MPO的活性，細胞因子IL-6、TNF-α、炎癥介質(zhì)NO、PGE2、LTB4的產(chǎn)生和釋放，進一步揭示了EFIS的抗炎機制。有效部位經(jīng)過進一步的分離鑒定，得到5種單體成分，分別為橙皮素(Hesperetin，H)，秦皮乙素（Esculetin， E），傘形香豆素（

3、Umbelliferone，U），姜黃素（Curcumin，C）以及東莨菪亭（Scopoletin， S）。前期研究發(fā)現(xiàn)， EFIS單體東莨菪亭和橙皮素合用后，小劑量情況下呈協(xié)同作用，大劑量則為拮抗作用。在此基礎(chǔ)上，本實驗研究5個單體成分的抗炎活性，聯(lián)用后的配比劑量及其作用機制。選取巴豆油致小鼠耳腫脹和角叉菜膠致大鼠足腫脹兩個急性炎癥模型為指標，研究5個單體成分的抗炎作用和研究5個單體聯(lián)用后的主要作用成分、最佳配比劑量；在細胞模型上檢測

4、各個單體對于炎性蛋白COX-2、5-LOX的蛋白表達水平影響和對MAPK通路的作用，探討IS的抗炎機制。
　　方法：
　　1.觀察5個單體對巴豆油致小鼠耳腫脹和角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的抗炎活性；
　　2.利用均勻設(shè)計法研究5個單體聯(lián)用對兩個急性炎癥模型的影響，得到主要作用成分和最佳配比劑量；
　　3.在脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7巨噬細胞模型中，用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測EFIS

5、單體對COX-2、5-LOX、MAPKs家族成員ERK1/2和P38蛋白表達水平及ERK1/2和P38活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1. EFIS中單體對巴豆油致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足腫脹都有顯著的抑制作用，以東莨菪亭和姜黃素的作用最強；
　　2.5個單體聯(lián)用在巴豆油致小鼠耳腫脹模型中，起主要作用的單體為東莨菪亭，姜黃素和傘形香豆素，最佳劑量配比為：H=600 mg/kg，E=500 mg/kg，U=1000 m

6、g/kg， C=200 mg/kg，S=80 mg/kg；在角叉菜膠致大鼠足腫脹模型中，起主要作用的單體為東莨菪亭，姜黃素和傘形香豆素，最佳劑量配比為：H=355 mg/kg，E=440 mg/kg， U=700 mg/kg，C=265 mg/kg，S=40 mg/kg。
　　3. EFIS中各單體均能抑制LPS誘導(dǎo)的COX-2和5-LOX蛋白表達，以姜黃素和東莨菪亭作用最為顯著；各單體均對LPS誘導(dǎo)的ERK1/2活性增加有抑制作

7、用，對總ERK蛋白表達無作用；對p-P38蛋白表達有抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1. EFIS5個有效單體橙皮素、秦皮乙素、傘形香豆素、姜黃素和東莨菪亭對巴豆油致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足腫脹兩個急性炎癥模型有不同程度的抑制作用，提示各單體均為有效成分，具有抗炎活性。
　　2. EFIS5個單體聯(lián)用后在兩個急性炎癥模型中起主要作用的均為傘形香豆素、姜黃素和東莨菪亭；兩個急性炎癥模型中各單體的最佳配比劑量接近。即得到了