表面增強拉曼信號放大傳感分析方法在重大疾病相關活性分子檢測中的應用.pdf

1、在重大疾病的診斷和治療中，蛋白質(zhì)和核酸通常被認為是非常重要的生物標志物和治療目標物。然而在疾病早期，這些相關活性分子的濃度一般是很低的，因此，能夠獲得蛋白質(zhì)和核酸的高靈敏度檢測對于疾病的早期診斷和治療是非常重要的。本文結合表面增強拉曼光譜在生物分析領域中表現(xiàn)出的準確、快速、選擇性好等優(yōu)點，通過構建靶替代循環(huán)、聚合酶鏈剪切循環(huán)和發(fā)夾DNA引發(fā)的循環(huán)放大方法，結合納米金生物條形碼技術，實現(xiàn)了對溶菌酶和PDGF等生物活性分子的靈敏度檢測。本論

2、文主要分為下面三個部分的內(nèi)容:
　　1、基于核酸適體的特異性識別功能和發(fā)夾DNA的結構互變性質(zhì)，采用表面增強拉曼光譜檢測技術，構建了一種發(fā)夾型適體DNA循環(huán)放大SERS檢測溶菌酶的方法。本方法主要以發(fā)夾型適體DNA、聚合酶、內(nèi)切酶以及攜帶有拉曼信號分子的納米金生物條碼探針為原料，設計了雙重循環(huán)放大模式（即靶替代循環(huán)和聚合酶鏈取代循環(huán)），其放大效率得到顯著提高。在最佳的反應條件下，該方法檢測溶菌酶的線性濃度范圍為1.0×10-14～

3、1.0×10-11 M，檢測限可達6.3 fM(3σ)，實現(xiàn)了溶菌酶的靈敏檢測。該方法操作簡便快速，靈敏度高，選擇性好，為表面增強拉曼檢測在生化分析中的應用提供了一種新穎的思路和辦法。
　　2、為進一步提高SERS信號放大的效率，在之前實驗工作的基礎上，構建了一種基于三螺旋分子開關的表面增強拉曼傳感級聯(lián)信號放大系統(tǒng)用于溶菌酶的檢測。該體系采用三螺旋分子作為溶菌酶的適體，設計了三重循環(huán)放大模式，包括靶替代循環(huán)、單鏈DNA引發(fā)的聚合剪

4、切替代循環(huán)和聚合酶鏈取代循環(huán)，進一步提高了放大效率。在最佳反應條件下，該方法的檢測限為0.54 fM(3σ)，比雙螺旋體系的檢測靈敏度提高了1個數(shù)量級。通過檢測實際樣品里的回收率，驗證了該方法在實際樣品檢測中的有效性。該方法與其他檢測方法相比，具有選擇性好、靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點，在腫瘤標志物或其他生化分析檢測領域具有廣闊的應用前景。
　　3、利用核酸適體的結構互變特性，結合聚合酶鏈取代放大反應，本實驗研制了一種基于發(fā)夾自產(chǎn)生的

5、雙重聚合酶鏈取代放大SERS檢測PDGF-BB的方法，該方法結合PDGF-BB適體的特殊結構，當適體結合目標物后，可形成發(fā)夾DNA結構，發(fā)夾DNA的一端以自身DNA鏈為模板，進行聚合酶鏈取代反應，釋放大量的單鏈DNA，用于引發(fā)進一步的聚合酶鏈取代反應，最后在金片基底上捕獲了大量的納米金生物條碼拉曼信號探針，從而提高檢測的靈敏度，其檢測限為5.8pM。該方法易于合成，具有較好的選擇性和靈敏性，為蛋白質(zhì)及其他重大疾病相關分子的檢測提供了新的