結(jié)節(jié)性硬化癥相關(guān)腎臟血管平滑肌脂肪瘤基因突變及mTOR通路研究.pdf

1、第一部分TSC-RAML患者TSC1/TSC2突變位點(diǎn)檢測與分
　　目的:明確TSC1/TSC2致病性突變在TSC-RAML患者中的分布，探索基因型與臨床表型之間的關(guān)系。
　　方法:本組研究對象共24例，其中，TSC確診患者22例，TSC疑似患者2例;22例TSC確診患者中TSC-RAML患者20例。經(jīng)知情同意，取外周靜脈血3ml，通過微陣列芯片捕獲，在Illumina HiSeq2500平臺上進(jìn)行高通量測序，并將檢測結(jié)果與

2、LOVD數(shù)據(jù)庫比對。
　　結(jié)果:22例TSC確診患者中，TSC1突變4例，TSC2突變15例，未檢測到突變3例。20例TSC-RAML患者中，TSC突變率85％(17/20)，TSC1;TSC2約為1∶4.7(3vs14)，TSC1/TSC2突變位點(diǎn)的分布均較為彌散，突變類型以無義突變(41.2％)及框移突變(35.3％)為主。TSC1及TSC2突變患者中，最小年齡分別為14歲及8歲，RAML的最大直徑分別為10.3cm及＞20c

3、m，RAML最大直徑≥10cm的例數(shù)分別為1例及8例。通過與LOVD數(shù)據(jù)庫比對，檢測出新發(fā)突變位點(diǎn)8例，TSC1突變1例，TSC2突變7例。3例家系中，先證者RAML最大直徑分別為10、10.3及16cm，而家系成員RAML最大直徑分別為0、0及1cm。
　　結(jié)論:TSC-RAML患者基因突變以TSC2為主，突變位點(diǎn)彌散，以無義突變及框移突變?yōu)橹?TSC2突變患者RAML發(fā)病年齡相對更早，病情相對更重;TSC-RAML臨床表現(xiàn)個體

4、化差異較大，但與突變位點(diǎn)及突變類型可能無關(guān)。
　　第二部分TSC-RAML組織中mTOR信號通路激活水平研究
　　目的:研究mTOR信號通路在TSC-RAML組織中的激活水平。
　　方法:研究組5例TSC-RAML標(biāo)本，對照組10例S-RAML標(biāo)本及10例非腎臟腫瘤患者的正常腎組織標(biāo)本，以免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測p-mTOR、p-S6K1及 p--4EBP1在上述3組標(biāo)本中的表達(dá)。
　　結(jié)果:p-mTOR在TSC

5、-RAML中呈陽性或強(qiáng)陽性表達(dá)，在S-RAML中呈弱陽性表達(dá);p-S6K1在TSC-RAML中呈陽性表達(dá)，在S-RAML中呈弱陽性或陰性表達(dá);p-4EBP1在TSC-RAML中呈陽性或弱陽性表達(dá)，在S-RAML中呈弱陽性表達(dá);p-mTOR、p-S6K1及p-4EBP1在正常腎臟組織中均呈陰性表達(dá)。5例TSC-RAML標(biāo)本中，p-mTOR及p-4EBP1在發(fā)生TSC2突變的3例患者標(biāo)本中的表達(dá)水平相對高于2例發(fā)生TSC1突變患者的標(biāo)本，而

6、p-S6K1在TSC1突變及TSC2突變患者標(biāo)本的表達(dá)無明顯差別。
　　結(jié)論:與S-RAML及正常腎臟組織相比，mTOR信號通路在TSC-RAML組織中的激活程度相對較高;與TSC1突變相比，mTOR信號通路在TSC2突變患者的RAML組織中激活程度相對較高。
　　第三部分mTOR抑制劑治療TSC-RAML的療效及安全性初步研究
　　目的:評估m(xù)TOR抑制劑everolimus治療TSC-RAML的療效及安全性。

7、>　　方法:單中心、開放、非隨機(jī)臨床研究，研究對象為臨床確診的TSC-RAML患者，按照納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格篩選后，符合標(biāo)準(zhǔn)的患者給予everolimus10mg/d口服，治療時間為一年，常規(guī)隨訪時間為開始服藥后第3、6、12及24個月，治療期間可根據(jù)患者耐受情況調(diào)整藥物用量。詳細(xì)評估和記錄患者服藥前基線數(shù)據(jù)及服藥后病情變化，以及治療相關(guān)不良事件。
　　結(jié)果:截止目前，已有5例TSC-RAML患者入組并口服everolimus治

8、療3個月。與基線數(shù)據(jù)相比，每例患者的RAML均有明顯減小，RAML最大直徑平均縮小3.8(1.5—6) cm，最大直徑平均減小百分比28.2％(15.4％～38％)。5例患者的面部血管纖維瘤也明顯變淡變平。2例患者精神癥狀較前明顯好轉(zhuǎn)。口腔炎、咳嗽、上呼吸道感染、皮疹為最常見不良事件，其中僅1例3級不良事件，其余均為1～2級。
　　結(jié)論:mTOR抑制劑everolimus在TSC-RAML治療中療效顯著，TSC-RAML直徑減小明