青年發(fā)病型開角型青光眼MYOC、OPTN、WDR36和NTF4基因變異研究.pdf

1、目的：探究MYOC、OPTN、WDR36和NTF4基因變異在中國潮汕人群青年發(fā)病型開角型青光眼（juvenile-onset open-angle glaucoma, JOAG）患者中的分布。
　　方法：研究對象為在2006年至2013年在汕頭國際眼科中心確診的青年發(fā)病型開角型青光眼患者共46例（確診年齡10-35歲）及200例老年性白內(nèi)障患者作為對照組（年齡≥60）。收集研究對象的血樣，提取 DNA，首先對JOAG組的DNA聚合

2、酶鏈反應(yīng)（PCR）擴增后進行MYOC、OPTN、WDR36和NTF4編碼區(qū)及其聯(lián)接區(qū)Sanger測序。然后對有編譯碼區(qū)變異的片段在對照組中測序驗證。等位基因頻率及基因型頻率在兩組中的差別由卡方檢驗或Fisher確切概率法計算所得；錯義變異用 Polyphen-2軟件預(yù)測其蛋白功能影響；新報道的可能致病突變查詢Homologene數(shù)據(jù)庫行蛋白氨基酸序列比對；連鎖分析及單體型分析由Haploview軟件完成。
　　結(jié)果:（1）MYOC

3、測序在JOAG組非驗證片段中發(fā)現(xiàn)3個單核苷酸變異（SNVs）；在兩組共同驗證片段發(fā)現(xiàn)11個SNVs，包括1個僅存在于對照組的新錯義突變（T351N）。在共同驗證片段中，發(fā)現(xiàn)2個已報道為致病突變的變異（G367R、P370L）僅存在于JOAG組中，Polyphen-2軟件預(yù)測顯示這2個突變均引起蛋白功能改變；G367R突變由1名JOAG患者攜帶，P370L突變由另外3名患者攜帶，總共約占本研究所有JOAG患者的8.7％。c.369C>T與

4、c.864C>T緊密連鎖（R2=1.0），其單體型在兩組中分布無顯著差異（P>0.05）。
　?。?）OPTN測序在JOAG組非驗證片段中發(fā)現(xiàn)9個SNVs，包括1個新內(nèi)含子區(qū)突變（IVS13+21C>G）；在兩組共同驗證片段發(fā)現(xiàn)15個SNVs，包括5個新突變（I88T、R329G、L494W、IVS14-85C>T、IVS14-57T>C）。在共同驗證片段中，發(fā)現(xiàn)2個新錯義突變（G367R、P370L）僅存在于JOAG組中，Pol

5、yphen-2軟件預(yù)測2個突變均導(dǎo)致蛋白功能改變，蛋白氨基酸序列比對顯示這2個突變所對應(yīng)氨基酸均位于高度保守區(qū)；R329G和L494W分別僅存在于1名 JOAG患者中，總共約占本研究所有 JOAG患者的4.3%。c.102G>A與IVS4+66A>G緊密連鎖（R2=0.988），IVS5-63A>G與IVS5-56C>T緊密連鎖（R2=1.0），其單體型在兩組中分布無顯著差異（P>0.05）。
　?。?）WDR36測序在JOAG組

6、非驗證片段中發(fā)現(xiàn)13個SNVs；在兩組共同驗證片段發(fā)現(xiàn)5個SNVs，包括1個新內(nèi)含子區(qū)突變（IVS18-8T>C）。在共同驗證片段中，這些變異在兩組中分布均無顯著差異（P>0.05）。c.790A>G與c.2181A>T緊密連鎖（R2=0.881），其單體型在兩組中分布無顯著差異（P>0.05）。
　?。?）在JOAG組對NTF4編碼區(qū)及聯(lián)接區(qū)測序未發(fā)現(xiàn)變異。
　　結(jié)論:本研究顯示在中國潮汕人群JOAG患者中，MYOC突變和