誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑合成與抑制效果的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的敗血性休克時(shí)頑固性血壓下降、血管對(duì)縮血管物質(zhì)的低反應(yīng)性等原因，導(dǎo)致敗血癥休克的死亡率高達(dá)35％-50％。研究已經(jīng)證明：敗血癥休克時(shí)，iNOS大量表達(dá)，生成過(guò)量的NO在病情的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，起著重要的作用。而抑制iNOS產(chǎn)生，減少NO水平可以改善血流狀態(tài)，減輕組織的病理?yè)p害，增強(qiáng)心血管系統(tǒng)對(duì)于β受體激動(dòng)劑的反應(yīng)性，從而提高敗血癥休克的生存率。因此特異選擇性好、活性強(qiáng)的iNOS抑制劑有著良好的治療前景。本實(shí)驗(yàn)合成新的高效特異的iNOS抑

2、制劑硝基精氨酸—賴氨酸三肽。在體外實(shí)驗(yàn)中研究其對(duì)NO產(chǎn)生、eNOS和iNOS活性影響及其作用機(jī)制；在狗的敗血性休克模型上觀察此新合成化合物的升壓作用。 方法1.用液相合成法合成由左旋精氨酸、左旋賴氨酸組成的小分子三肽。2.給予人單核細(xì)胞PMA刺激使之轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞，用內(nèi)毒素刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)iNOS的表達(dá)，檢測(cè)三肽對(duì)NO的產(chǎn)生、iNOS活性、iNOS蛋白表達(dá)的影響。以及不同濃度三肽對(duì)于NO產(chǎn)生的影響。 3.原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)

3、皮細(xì)胞，以胰島素增強(qiáng)eNOS的表達(dá)，檢測(cè)三肽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生、eNOS活性的影響。 4.用靜脈注射大腸桿菌0111：B4菌液法建立狗敗血癥休克模型，檢測(cè)三肽對(duì)敗血癥休克動(dòng)物的血壓及血清中NO的影響。 結(jié)果1.以液相合成法合成硝基精氨酸—賴氨酸三肽，其分子式如下HCl·Arg(NO2)-Lys(OCH3)-Arg(NO2)·HCl(MW=635)，三肽在水中的性質(zhì)穩(wěn)定。 2.內(nèi)毒素刺激巨噬細(xì)胞可以明顯增加NO的產(chǎn)

4、生，同對(duì)照組相比，給予等濃度(10-4mol/L)的三肽(P＜0.01)和L-NNA(P＜0.05)均可以抑制NO的產(chǎn)生，而三肽的抑制作用明顯強(qiáng)于L-NNA的作用(P＜0.05). 3.在1×10-4mol/L、2.5×10-4mol/L、5.0×10-4mol/L、7.5×10-4mol/L濃度組中，三肽對(duì)NO的抑制作用隨著濃度的增加不斷增強(qiáng)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而7.5×10-4mol/L、10.0×10-4mol/L兩組，雖然

5、三肽可以繼續(xù)增強(qiáng)其對(duì)NO產(chǎn)生的抑制作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.同對(duì)照組相比，三肽(P＜0.01)和L-NNA(P＜0.05)均可以明顯抑制iNOS的活性，三肽比L-NNA具有更強(qiáng)的iNOS活性抑制作用(P＜0.05)。而L-NNA也同時(shí)明顯抑制cNOS活性(P＜0.05)。三肽對(duì)于cNOS活性的抑制作用，同L-NNA相比明顯減輕(P＜0.05)，同對(duì)照組相比雖然也抑制cNOS活性，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.三肽和L-NNA對(duì)

6、于iNOS的蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。 6.同對(duì)照組和三肽組相比，L-NNA可以明顯減少臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO的產(chǎn)生(P＜0.05)、抑制eNOS的活性(P＜0.05)。而三肽同對(duì)照組比較，也可以減少臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO的產(chǎn)生和eNOS的和活性，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7.靜脈注射大腸桿菌菌液成功制造敗血癥休克動(dòng)物的模型。靜脈注射菌液5小時(shí)后，動(dòng)物血壓明顯降低，血清中NO濃度明顯升高，同對(duì)照組相比，0.01mmol/kg的三肽(P＜0.0

7、1)和L-NNA(P＜0.05)均可以明顯降低敗血癥休克犬血清的NO，而三肽的作用較L-NNA更明顯(P＜0.05)。 8.同對(duì)照組相比，三肽和L-NNA均可以升高敗血性休克犬的血壓。且三肽對(duì)于血壓影響作用較L-NNA更明顯。 結(jié)論1.三肽可以明顯抑制NO的合成。 2.其作用機(jī)制是通過(guò)抑制iNOS的活性而不是iNOS的蛋白表達(dá)，從而抑制NO的產(chǎn)生，其作用呈劑量依賴性。 3.三肽對(duì)于cNOS及eNOS活性抑