慢腎1號方對系膜增生性腎炎小鼠α-SMA、TGF-β1影響的實驗研究.pdf

1、目的：本文通過建立改良的慢性血清病系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)動物模型，應用慢腎1號方對該模型進行干預性治療，通過觀察MsPGN小鼠模型尿蛋白、血清腎功能指標、腎臟病理形態(tài)學以及腎組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)表達的變化，進一步明確慢腎1號方對系膜增生性腎小球腎炎的治療作用，并探討其治療系膜增生性腎小球腎炎的可能作用機理，為慢腎1號方更好的應用于臨床提供相關(guān)理論依據(jù)。 方法：昆明種

2、小鼠40只，采用雙后足墊皮下注射完全弗氏試劑(CFA)的方法進行預免疫后，腹腔注射牛血清白蛋白(BSA)并尾靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)進行免疫，復制系膜增生性腎小球腎炎小鼠模型。造膜后，選取24小時尿蛋白總量及血肌酐、尿素氮明顯升高(均較造模前出現(xiàn)顯著性差異)的小鼠20只，隨機分為模型組、慢腎1號方組，每組10只，并以正常昆明種小鼠10只為正常組。各組小鼠每天灌胃給藥一次，連續(xù)4周。治療組喂以慢腎1號方0.5ml/只，正常組和模型

3、組均喂以生理鹽水0.5ml/只。治療后用考馬斯亮藍法測定各組小鼠尿蛋白含量，分別用苦味酸除蛋白法和二乙?！糠y定各組小鼠血肌酐和尿素氮的含量，在光鏡下觀察各組小鼠腎組織病理學改變情況，采用免疫組織化學法檢測各組小鼠腎組織中α-SMA、TGF-β1的表達情況，并用病理圖象分析系統(tǒng)對免疫組化染色結(jié)果進行半定量分析。 結(jié)果：24小時尿蛋白含量測定：模型組和慢腎1號方組均出現(xiàn)蛋白尿。與J下常組相比，模型組小鼠24小時尿蛋白顯著升高(P

4、<0.01)，慢腎1號方組24小時尿蛋白含量與模型組比較明顯降低(P<0.0 1)，且與正常組無顯著差異。腎功能檢測結(jié)果：模型組小鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(cr)與正常組相比顯著升高(P<0.0 1)。慢腎1號方組與模型組相比BUN、Cr均明顯降低(P<0.01)。腎組織光鏡學觀察：慢腎1號方組與模型組相比腎小球系膜區(qū)的寬度明顯減小，系膜細胞增生和系膜基質(zhì)積聚等超微結(jié)構(gòu)病變明顯減輕。腎組織中α-SMA表達的免疫組化結(jié)果：模型組腎小球系

5、膜區(qū)內(nèi)可見大量α-SMA陽性表達，尤其以腎小球血管極多見，慢腎1號方組α-SMA在腎小球的表達較模型組有明顯減少。半定量分析顯示，與正常組相比，模型組的腎小球α-SMA相對含量顯著增高(P<0.01)。與模型組相比，慢腎1號方組的腎小球α-SMA相對含量顯著降低(P<0.01)。腎組織中TOF-β1表達的免疫組化結(jié)果：模型組可以見到TGF-β1大量表達在毛細血管袢及系膜區(qū)，同時在腎間質(zhì)的表達亦明顯增多。慢腎1號方組TGF-β1在腎小球的

6、表達與模型組相比明顯減少。半定量分析顯示，正常組相比，模型組的腎小球TGF-β1相對含量顯著增加(P<0.01)。與模型組相比，慢腎1號方組的腎小球TGF-β1相對含量顯著降低(P<0.01)。結(jié)論：1、慢腎1號方能夠顯著減少MsPGN小鼠尿蛋白，降低血肌酐和尿素氮，促進腎小球病理損害的修復。進一步證實了其保護腎功能的作用。2、慢腎1號方可以抑制MsPGN小鼠腎組織α-SMA的表達，具有抑制腎小球系膜細胞的增殖的作用。3、慢腎1號方可以