大鼠自體全層皮膚移植成活過程中表皮干細(xì)胞變化規(guī)律研究.pdf

1、目的:探索大鼠自體全層皮膚移植成活過程中表皮干細(xì)胞隨其所處微環(huán)境的不斷改變而改變的變化規(guī)律,為表皮干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用提供理論依據(jù),為臨床改善自體皮膚移植的質(zhì)量提供理論基礎(chǔ),為組織工程皮膚的深入研究打下基礎(chǔ)。
　　方法:2~3月齡Wistar大鼠42只,隨機(jī)分成七組(每組6只),分別記為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組、第6組、第7組,每組分別代表自體皮膚移植術(shù)后七個時限點,即術(shù)后第1天、第3天、第5天、第7天、第14

2、天、第21天、第30天。每只大鼠于背部制作1.5cm x1.5cm面積大小的自體全層皮膚移植模型,并于手術(shù)當(dāng)時在切取皮片的邊緣和術(shù)后不同時間點在移植皮片中央切除組織固定、包埋、制作病理切片。采用免疫組化的方法檢測表皮干細(xì)胞的表面標(biāo)記物β1整合素、基因物質(zhì) p63的表達(dá),來觀察不同時間點表皮干細(xì)胞數(shù)量的變化及其在皮膚各層的分布變化。免疫組化切片在200倍光學(xué)顯微鏡下觀察。每張切片隨機(jī)觀察5個不同視野,每個視野隨機(jī)計算100個表皮細(xì)胞及其中

3、的陽性細(xì)胞數(shù),并計算陽性細(xì)胞率。每張切片5個不同視野陽性細(xì)胞率的均數(shù)代表該標(biāo)本陽性細(xì)胞率。每組動物所有陽性細(xì)胞率的均數(shù)代表該時限點陽性細(xì)胞率,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示。每一時限點術(shù)后和術(shù)前進(jìn)行對比研究以及術(shù)后各時限點之間進(jìn)行對比研究,數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。
　　結(jié)果:1、肉眼觀察每只動物自體全層皮膚移植效果理想,未見有明顯的感染和壞死,各個時限點移植的皮片外觀有明顯的區(qū)別。2、免疫組化檢測病理切片分為β1

4、整合素、基因物質(zhì) p63兩個指標(biāo)。兩個指標(biāo)的陽性細(xì)胞率在觀察的七個時限點中開始逐漸減少,在術(shù)后第3天左右達(dá)到最低,然后逐漸增加,在術(shù)后第7天左右其陽性細(xì)胞率開始接近或者超過術(shù)前,在術(shù)后第21天左右達(dá)到最高峰,然后又逐漸降低。且同一時限點同一標(biāo)本連續(xù)切片中β1整合素陽性細(xì)胞率要低于基因物質(zhì) p63陽性細(xì)胞率:(1)、β1整合素:術(shù)后第1組陽性細(xì)胞率(16.00±0.716)％比術(shù)前(18.70±0.690)%低(p=0.000<0.05)

5、;術(shù)后第2組陽性細(xì)胞率(8.03±1.28)%比術(shù)前(18.90±1.747)%低(p=0.000<0.05);術(shù)后第3組陽性細(xì)胞率(12.03±0.924)%比術(shù)前(18.10±1.244)%低(p=0.000<0.05);術(shù)后第4組陽性細(xì)胞率(17.00±0.848)%與術(shù)前(17.33±0.864)%相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.215>0.05);術(shù)后第5組陽性細(xì)胞率(19.83±0.852)%比術(shù)前(18.27±0.786)%高

6、(p=0.004<0.05);術(shù)后第6組陽性細(xì)胞率(29.966±2.615)%比術(shù)前(18.33±0.615)%明顯高(p=0.000<0.05);術(shù)后第7組陽性細(xì)胞率(19.43±0.924)%比術(shù)前(18.40±0.579)%高(p=0.023<0.05);(2)基因物質(zhì)p63:術(shù)后第1組陽性細(xì)胞率(26.53±0.786)%比術(shù)前(29.76±1.493)%低(p=0.001<0.05);術(shù)后第2組陽性細(xì)胞率(12.53±3.0

7、19)%比術(shù)前(29.73±3.238)%低(p=0.000<0.05);術(shù)后第3組陽性細(xì)胞率(19.36±1.176)%比術(shù)前(28.56±1.515)%低(p=0.000<0.05);術(shù)后第4組陽性細(xì)胞率(28.16±2.152)%與術(shù)前(28.33±2.572)%相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.517>0.05);術(shù)后第5組陽性細(xì)胞率(30.50±1.814)%比術(shù)前(28.10±1.543)%要高(p=0.013<0.05);術(shù)后第

8、6組陽性細(xì)胞率(39.97±2.832)%比術(shù)前(28.80±0.669)%明顯高(p=0.001<0.05);術(shù)后第7組陽性細(xì)胞率(29.80±1.043)%比術(shù)前(28.27±0.700)%高(p=0.015<0.05)。3、陽性細(xì)胞在術(shù)前主要位于表皮的基底層和毛囊隆突部,且呈片狀排列。隨著移植術(shù)后時間的推移,陽性細(xì)胞在皮膚中的排列結(jié)構(gòu)逐漸紊亂,逐漸分布到表皮的各層,但從第21天組開始發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞逐漸集中于表皮的基底層和毛囊隆突部,