自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞載體復(fù)合膜修復(fù)皮膚全層缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：用本實(shí)驗(yàn)室配制含自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的羊膜載體復(fù)合膜(羊膜-明膠-殼聚糖膜)植入皮膚全層缺損處．同時(shí)向該植入微環(huán)境內(nèi)添加緩釋的bFGF和vitC等有利于修復(fù)的因素，從而在整個(gè)真皮修復(fù)過(guò)程中加深對(duì)表皮新生和重建速度的影響，探討真皮修復(fù)過(guò)程中對(duì)表皮的修復(fù)和重建是否有影響以及是否有促進(jìn)表皮修復(fù)速度的最佳階段。 實(shí)驗(yàn)材料與方法:抽取24只新西蘭大耳白兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代并純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)

2、胞。將分離、純化出的第二代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以一定的密度接種于羊膜載體復(fù)合膜上，制成組織工程皮膚替代物。在每只兔的背側(cè)即脊柱兩側(cè)做三個(gè)創(chuàng)面，去除表真皮以及皮下組織，深度直達(dá)深筋膜，面積約為3.14cm<'2>，隨機(jī)分為A組B組和C組。將各組織工程皮膚替代物分別移植到三組創(chuàng)面上。A組創(chuàng)面即試驗(yàn)組：為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+牛羊膜-明膠-殼聚糖復(fù)合膜+bFGF和vitC。B組創(chuàng)面：為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+牛羊膜．明膠．殼聚糖復(fù)合膜．C組創(chuàng)面：僅單純?yōu)榕?/p>

3、羊膜．明膠．殼聚糖復(fù)合膜。分別在植入術(shù)后7天、14天、21天這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取材觀察結(jié)果。用圖像分析儀法測(cè)算出各組各時(shí)間點(diǎn)的創(chuàng)面平均愈合面積(cm2)并計(jì)算出愈合率、采用大體觀察、常規(guī)組織學(xué)觀察(HE染色、Masson染色、Van Giesonr染色)、I型膠原免疫組織化學(xué)觀察、電鏡觀察、墨汁灌注法等化學(xué)染色動(dòng)態(tài)觀察創(chuàng)面愈合情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: ①A組在7天、14天、21天各時(shí)間點(diǎn)的新生真皮明顯較B組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的厚、活躍的I型

4、膠原陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多、電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張的成纖維細(xì)胞、血管和膠原纖維均較B組的多．在同等條件下比較在7天、14天、21天各時(shí)間點(diǎn)B組比c組的修復(fù)效果好。②A組術(shù)后14天和21天新生真皮表面，從其周邊正常有毛的皮膚中，表皮再生長(zhǎng)入并覆蓋真皮修復(fù)創(chuàng)面的速度均比B組的快，在同等條件下比較B組的表皮覆蓋速度又比C組的快。尤其是在術(shù)后21天A組新生真皮全被新生表皮覆蓋，而且表皮幾乎均變?yōu)閺?fù)層，但是B組不但表皮覆蓋的面積少于A組而且覆蓋真皮修復(fù)創(chuàng)面的

5、表皮細(xì)胞層次均少于A組。③應(yīng)用圖像分析儀技術(shù)測(cè)得真皮修復(fù)創(chuàng)面的真皮厚度、表皮厚度、血管數(shù)量、成纖維細(xì)胞數(shù)量、愈合的創(chuàng)面面積并計(jì)算出創(chuàng)面愈合率。對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，通過(guò)方差分析得出，在真皮厚度、表皮厚度、血管數(shù)量、成纖維細(xì)胞數(shù)量、創(chuàng)面愈合率的比較中，A組B組和C組這三組有差異，A組比B組好，B組比C組好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 體外培養(yǎng)的組織工程皮膚替代物植入全層皮膚缺損后，并向該缺損微環(huán)境內(nèi)添加MSC和緩釋的b