骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合組織工程化脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)皮膚缺損.pdf

1、皮膚是人體最大的器官，它完整地覆蓋于身體表面，起到維護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和阻止微生物和化學(xué)物質(zhì)損害的作用。皮膚的大面際缺損是臨床上的難治性疾病，人們一直在尋求好的方法來(lái)解決這一臨床難題。許多因素，例如燒傷、創(chuàng)傷、頑固性皮膚潰瘍以及腫瘤切除手術(shù)等常常造成大面積皮膚缺損，這些常能導(dǎo)致更嚴(yán)重的疾病甚至死亡。因此，皮膚缺損的治療是非常重要的。目前臨床上常用的治療方法有自體、異體或異種皮移植，但自體皮來(lái)源有限，且存在造成供皮區(qū)新的創(chuàng)傷缺陷，異體皮、異種皮

2、移植仍存在一定的免疫排斥反應(yīng)，且有傳播疾病的危險(xiǎn)，難以滿足臨床應(yīng)用的需要。
　　組織工程學(xué)是一新興學(xué)科，它是利用種子細(xì)胞和支架材料來(lái)構(gòu)建所需要的組織工程器官。組織工程器官能解決臨床上可供移植器官短缺的問(wèn)題。組織工程皮膚是目前最成熟的組織工程產(chǎn)品，多種類型的組織工程皮膚已經(jīng)應(yīng)用于臨床，并取得良好的效果。
　　干細(xì)胞能夠保持自我更新、分化發(fā)展成許多類型成熟細(xì)胞且能快速增殖。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞，它能增殖分化成許多其他類

3、型的細(xì)胞。組織工程化脫細(xì)胞真皮是一種新型的組織工程支架材料，具有許多優(yōu)點(diǎn)，例如，它具有良好的三維支架結(jié)構(gòu)且組織相容性非常好。
　　本研究應(yīng)用組織工程學(xué)原理，利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和組織工程支架材料來(lái)構(gòu)建組織工程皮膚，用于皮膚缺損的治療。期望為臨床治療皮膚缺損提供新方法。
　　本研究主要分為四個(gè)部分：
　　1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增殖和膠原分泌的影響：首先，我們培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并收集其上清液。然后

4、，采用MTT法和羥脯胺酸比色法來(lái)檢測(cè)不同濃度的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和膠原分泌的影響。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞上清液可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和膠原的分泌。
　　2.體外構(gòu)建組織工程化脫細(xì)胞真皮基質(zhì)：首先，在體外培養(yǎng)擴(kuò)增成纖維細(xì)胞。然后把擴(kuò)增培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞和膠原按一定比例混合，構(gòu)建組織工程皮膚。連續(xù)培養(yǎng)10天后，我們應(yīng)用組織工程技術(shù)去除組織工程皮膚中的成纖維細(xì)胞。我們用掃描電鏡和HE染色來(lái)觀察所構(gòu)建的組織工程

5、皮膚。結(jié)果發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞去除完全，組織工程化脫細(xì)胞真皮基質(zhì)結(jié)構(gòu)良好。
　　3.骨髓間充干細(xì)胞復(fù)合組織工程化脫細(xì)胞真皮基質(zhì)構(gòu)建組織工程皮膚：首先，我們應(yīng)用密度梯度離心法分離純化鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。擴(kuò)增培養(yǎng)后，按照一定密度種植在組織工程化脫細(xì)胞真皮表面。在液體培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)12天，構(gòu)建出組織工程皮膚。我們通過(guò)掃描電鏡和組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程化脫細(xì)胞真皮基質(zhì)中生長(zhǎng)良好。
　　4.體內(nèi)觀察復(fù)合皮膚對(duì)動(dòng)物皮膚創(chuàng)面