魚腥草注射液的致敏性研究.pdf

1、魚腥草注射液為鮮魚腥草經(jīng)二次蒸餾后所制成的滅菌水溶液,主要含有揮發(fā)性成分,包括甲基正壬酮、癸酰乙醛、月桂醛等,其蒸餾液中含有約50多種成分。藥理研究證明魚腥草注射液有抗病原微生物,消炎、抗過敏、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、利尿、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、抗活性氧、止血等作用,臨床上被廣泛用于治療呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、皮膚病、耳鼻喉科感染、婦科感染等疾病的治療。但隨著魚腥草注射液在臨床上的廣泛應(yīng)用,其不良反應(yīng)的報(bào)道也屢見不鮮。在對魚腥草注射液進(jìn)行不良反應(yīng)調(diào)查

2、中發(fā)現(xiàn),魚腥草注射液所致的不良反應(yīng)可累及機(jī)體多個(gè)器官系統(tǒng),臨床表現(xiàn)亦復(fù)雜多樣,嚴(yán)重不良反應(yīng)有呼吸困難,急性肺水腫,喉頭水腫,心跳呼吸驟停和死亡,直接死亡因?yàn)闉檫^敏性休克。那么魚腥草注射液的致敏特點(diǎn)是什么,其致敏物質(zhì)又是什么,導(dǎo)致超敏反應(yīng)發(fā)生的機(jī)理是什么,有必要對此進(jìn)行深入研究,以便尋找防治魚腥草注射液不良反應(yīng)的途徑和方法,確實(shí)保障人民群眾的用藥安全。
　　 [目的]
　　 明確魚腥草注射液的超敏反應(yīng)特點(diǎn),確定魚腥草注射液

3、的過敏反應(yīng)物質(zhì),并初步探討其過敏反應(yīng)發(fā)生的機(jī)理。
　　 [方法]
　　 1.魚腥草注射液的“過敏反應(yīng)”特點(diǎn)研究
　　 1.1豚鼠和BN大鼠的主動全身過敏試驗(yàn)
　　 將豚鼠和BN大鼠均隨機(jī)分為以下各組:①陰性對照組(C)；②陽性對照組(P)；③魚腥草注射液組(YT)；④吐溫80組(T)；⑤魚腥草蒸餾液組(Y)。試驗(yàn)分為致敏和激發(fā)二個(gè)階段。
　　 致敏:于試驗(yàn)的第1、3、5天,各組分別腹腔注射相應(yīng)受試

4、物:C組為生理鹽水；P組為0.6％血清白蛋白(BSA)；YT組為含0.5％吐溫的魚腥草注射液；T組為含0.5％吐溫的生理鹽水；Y組為魚腥草二次蒸餾液(用NaCl調(diào)節(jié)滲透壓)。注射體積均為1ml/只。
　　 1.2大鼠的被動皮膚過敏試驗(yàn)
　　 致敏血清制備:將BN大鼠隨機(jī)分成以下各組:①正常對照組(C)；②佐劑對照組(A)；③陽性對照組(P)；④魚腥草注射液組(YT)；⑤吐溫80組(T)；⑥魚腥草蒸餾液組(Y)；每組6只動

5、物。將魚腥草注射液、0.5％吐溫80和魚腥草蒸餾液組分別與弗氏完全佐劑以1:1研勻,配制各組的致敏受試物。將上述混勻后的致敏受試物物分別于D1、D3、D5給BN大鼠腹腔注射,各1 ml。末次注射后21天,將動物用戊巴比妥鈉麻醉(30 mg/kg,ip),從腹腔動脈取血,3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘,分離血清,凍存于-80℃?zhèn)溆谩?br>　　 被動皮膚致敏:將SD大鼠隨機(jī)分成與BN大鼠各組對應(yīng)的6組,每組5只。將上述各組的致敏血清用生理鹽

6、水稀釋成1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32。將SD大鼠沿脊柱兩側(cè)預(yù)先脫毛3×4cm2,分別在脫毛區(qū)的左上、右上、左中、右中、左下、右下部位皮內(nèi)注射1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32的稀釋血清0.1mL以被動致敏。
　　 1.3 Beagle犬類過敏試驗(yàn)
　　 將健康雄性Beagle犬隨機(jī)分為2組:對照組(C)和魚腥草注射液組(YT),每組5只。C組ⅳ生理鹽水,YT組ⅳ魚腥草注射液組,給藥體

7、積均為3.3mL/kg。2周后,再次注射給藥一次。首次注射和再次注射給藥后即刻至30 min內(nèi),觀察動物的“過敏反應(yīng)”癥狀,并進(jìn)行反應(yīng)程度評分。于給藥后30min測定收縮壓(Systilic blood pressure,SBP),舒張壓(Diastolic blood pressure,DBP)；肉眼觀察呼吸頻率。
　　 2.魚腥草注射液的致敏物質(zhì)研究
　　 2.1 Beagle犬類過敏試驗(yàn)
　　 將健康雄性B

8、eagle犬隨機(jī)分為4組:C組、T組、Y組和YT組；每組4只。給藥前,先測定動物血壓、心率和呼吸。然后C組ⅳ生理鹽水:T組ⅳ0.5％吐溫80; YT組ⅳ魚腥草注射液組；Y組ⅳ魚腥草蒸餾液；各組給藥體積均為3 ml/kg,緩慢推注,2分鐘推完。給藥后即刻開始,記錄動物的過敏反應(yīng)癥狀及其出現(xiàn)的時(shí)間以及反應(yīng)程度,并于給藥后10min和30min,分別測定動物的血壓、心率和呼吸。首次給藥一個(gè)月后,再次采用上述同樣的給藥方法進(jìn)行試驗(yàn)。
　　

9、 2.2小鼠類過敏試驗(yàn)
　　 將ICR小鼠隨機(jī)分為10組,每組10只動物:C組(ⅳ生理鹽水)；Compound48/80(ⅳ5 mg/g)；Y組(ⅳ魚腥草蒸餾液)；T1組(ⅳ0.5％吐溫80)；T2組(ⅳ2.5％吐溫80)；T3組(ⅳ5％吐溫80)；T4組(ⅳ10％吐溫80)；YT1組(ⅳ含0.5％吐溫80魚腥草注射液)；YT2組(ⅳ含2.5％q土溫80魚腥草注射液)；YT3組(ⅳ含5.0％吐溫80魚腥草注射液)；YT4組(ⅳ

10、含10％吐溫80魚腥草注射液)。以上所有組的受試物包括生理鹽水均用0.4％伊文思藍(lán)配制。各組小鼠分別靜脈給予20ml/kg。給藥后觀察1h內(nèi)動物的行為學(xué)變化,耳廓藍(lán)染情況。小鼠于給藥后1h剪下雙耳,用3ml冷丙酮浸泡,用分光光度計(jì)檢測耳廓的伊文思藍(lán)滲出量。
　　 3.吐溫80的致類過敏機(jī)理初步研究
　　 3.1吐溫80對Beagle犬補(bǔ)體系統(tǒng)的作用
　　 在2.1試驗(yàn)中,于給藥后10、30min取血,分離血漿,用

11、半數(shù)溶血試驗(yàn)法和ELISA試劑盒測定血漿的總補(bǔ)體活性(CH50)；用ELISA試劑盒測定末端補(bǔ)體激活復(fù)合物(C5b-9)含量。
　　 3.2吐溫80對SD大鼠的血漿組胺和補(bǔ)體活性的影響
　　 將SD大鼠分為:C組、0.5％T組、2.0％T組、YT組、陽性藥compand48/800.625mg/kg組。給藥組動物均ⅳ給予相應(yīng)的受試物,給藥量10 mL/kg,1min內(nèi)給藥完畢。C組給予等體積生理鹽水。分別于注射后10、2

12、0、30 min,取血,分離血清。用ELISA試劑盒測定總補(bǔ)體活性、補(bǔ)體激活片段C5b-9、組胺及類胰蛋白酶含量的影響。
　　 3.3吐溫80對BN大鼠及豚鼠血清IgE含量的影響
　　 將BN大鼠、豚鼠分別隨機(jī)分為:C組,佐劑組,0.2％吐溫80組,4)佐劑+吐溫組。于試驗(yàn)的第1、3、5天給動物腹腔注射0.2％吐溫1ml以致敏,于末次致敏后第7、14天,吐溫組靜脈注射含0.8％吐溫生理鹽水乳液1 ml/只進(jìn)行激發(fā)刺激:而

13、對照組靜脈注射相同體積生理鹽水。每次激發(fā)后1 h內(nèi),從眼眶靜脈叢取血,分離血清,采用ELISA競爭試驗(yàn)法檢測IgE含量。
　　 [結(jié)果]
　　 1.魚腥草注射液的“過敏反應(yīng)”特點(diǎn)
　　 1.1魚腥草注射液不引起免疫介導(dǎo)的過敏反應(yīng)
　　 豚鼠和BN大鼠全身過敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,T組、YT組和Y組無論是致敏(D1、3、5天腹腔注射)給藥,還是二次激發(fā)給藥后,所有動物均未見典型的過敏反應(yīng)癥狀。而陽性藥BSA組激發(fā)后

14、出現(xiàn)典型的過敏反應(yīng),陽性率為100％,過敏反應(yīng)程度為強(qiáng)陽性反應(yīng)。結(jié)果提示,魚腥草注射液組、吐溫80以及魚腥草蒸餾液均不引起免疫介導(dǎo)的主動全身過敏反應(yīng)
　　 大鼠的被動皮膚過敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,只有陽性對照組(BSA組)的被動皮膚過敏反應(yīng)為陽性,陽性率為100％。其他實(shí)驗(yàn)組包括T組、YT組和Y組均未能誘導(dǎo)被動皮膚過敏反應(yīng),結(jié)果均為陰性。結(jié)果提示,魚腥草注射液組、吐溫80以及魚腥草蒸餾液均不引起免疫介導(dǎo)的被動皮膚過敏反應(yīng)。
　　

15、 以上二類試驗(yàn)結(jié)果表明,魚腥草注射液的“過敏反應(yīng)”可能不是由免疫介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。
　　 1.2魚腥草注射液可引起的類過敏反應(yīng)
　　 Beagle犬首次給藥后,YT組的所有動物迅速(給藥后約2～5min)出現(xiàn)口唇、耳部紅腫、煩躁、甩頭,前肢撓頭、撓耳、蹭鼻、添舌,步態(tài)不穩(wěn),靜臥,排尿,排便,惡心等類似過敏反應(yīng)的癥狀,反應(yīng)陽性率為100％,反應(yīng)程度達(dá)強(qiáng)陽性標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí),該組動物的血壓明顯下降,呼吸頻率增快。再次給藥后的癥狀與單

16、次給藥相似,反應(yīng)未見增強(qiáng)。C組的所有動物均未出現(xiàn)異常反應(yīng),血壓正常。由于魚腥草注射液首次靜脈注射即可導(dǎo)致明顯的反應(yīng),因此,認(rèn)為不是免疫介導(dǎo)的過敏反應(yīng),而是類過敏反應(yīng)。
　　 2.魚腥草注射液的致敏物質(zhì)是吐溫80
　　 小鼠靜脈注射加有0.4％伊文思藍(lán)為指示劑的0.5～10.0％吐溫80、含0.5～10.0％吐溫80魚腥草注射液后,均可見耳廓血管通透性增高,耳廓呈不同程度藍(lán)染,并呈現(xiàn)劑量依賴性。而魚腥草蒸餾液不引起小鼠耳廓

17、血管通透性增高。該結(jié)果也證明吐溫80是魚腥草注射液中的主要致類過敏物質(zhì)。
　　 3.吐溫80的致類過敏機(jī)理初步研究
　　 吐溫80可導(dǎo)致Beagle犬血漿總補(bǔ)體活性(CH50)降低和補(bǔ)體激活片段復(fù)合物(C5b-9)含量增加,注射藥物后10 min較明顯。BALA/C小鼠靜脈注射2.0％吐溫后,血漿組胺含量明顯升高。結(jié)果提示,吐溫80致類過敏機(jī)理可能與補(bǔ)體激活和組胺釋放有一定關(guān)系。
　　 [結(jié)論]
　　 1

18、.魚腥草注射液導(dǎo)致的過敏反應(yīng)可能是一種不需要抗體IgE介導(dǎo)的類過敏反應(yīng)。
　　 2.魚腥草注射液的超敏反應(yīng)與魚腥草二次蒸餾液關(guān)系不大；而其助溶劑0.5％吐溫80給藥后表現(xiàn)為明顯的超敏反應(yīng)癥狀,表明吐溫80是魚腥草注射液中的主要致敏物質(zhì)。
　　 3.吐溫80導(dǎo)致類過敏反應(yīng)的發(fā)生是多條途徑共同作用的結(jié)果:①通過激活補(bǔ)體系統(tǒng),產(chǎn)生過敏毒素,誘發(fā)過敏反應(yīng)的發(fā)生；②在不依賴IgE抗體的情況下,直接誘導(dǎo)肥大細(xì)胞脫顆粒,釋放組胺等活性