小鼠胚胎發(fā)育時期腦內SP和SPR的定位.pdf

1、[背景和目的] P物質(SP)廣泛分布于中樞神經系統(tǒng)和外周神經系統(tǒng)中，是由中樞和外周初級傳入神經末梢釋放的一種神經遞質。哺乳動物的SP由前速激肽原(Preprotachykinin，PPT)A基因編碼。PPT-A基因同樣編碼其他速激肽如neurokininA，neuropeptideB等。速激肽受體也被分為速激肽NK1受體，速激肽NK2受體，速激肽NK3受體。速激肽NK1受體與SP有著最強親和力，即P物質受體(SPR)。SP與S

2、PR特異結合后使受體內化，通過激活磷脂酶C(PLC)并水解磷酸肌醇(PIP2)生成三磷酸肌醇(IP3)和二酯酰甘油(DAG)兩種第二信使發(fā)揮生物學效應。 已有的實驗發(fā)現在小鼠胚胎時期腦內已有SP表達，但其與中樞神經系統(tǒng)發(fā)育的關系仍不清楚，而且關于SPR在小鼠胚胎時期腦發(fā)育過程中的表達也未見報道，因此調查SP與SPR在小鼠胚胎時期腦的分布情況及其相互間關系，可以為進一步研究SP在中樞神經系統(tǒng)發(fā)育階段所起的作用提供形態(tài)學依據。本研究

3、采用免疫組織化學染色方法結合westernblotting半定量方法，使用特異性SP和SPR抗體，觀察SP和SPR在小鼠胚胎發(fā)育時期腦內表達的變化，推測胚胎發(fā)育階段SP在中樞神經系統(tǒng)中所起的作用。 [材料與方法] 1.實驗動物及組織切片制備 分別取E11(胚胎11天)，E13，E15，E17，E19和P0(新生)ICR品系小鼠腦經冠狀切面進行連續(xù)冰凍切片。 2.酶標免疫組織化學 將冰凍切片分別滴加

4、兔抗SP多克隆抗體和抗SPR多克隆抗體，生物素標記的羊抗兔IgG，加入抗生物素蛋白—辣根過氧化物酶復合物，二甲基聯苯胺呈色觀察。 3.Westernblotting 取E11(胚胎11天)，E13，E15，E17，E19和P0ICR品系小鼠腦組織提取蛋白，行聚丙酰胺凝膠電泳，轉移至硝酸纖維膜并加抗體作用，二甲基聯苯胺呈色觀察。 [結果] 1.在小鼠胚鼠發(fā)育各階段腦中SP和SPR的形態(tài)和分布 E11

5、，SP陽性細胞只有在上丘腦尾側段神經上皮邊緣層有一定表達，沒有檢測到SP陽性纖維。SPR陽性細胞則在腹側下丘腦神經上皮、腦橋神經上皮和扣帶回皮質有少量表達。 E13，SP陽性細胞開始在新紋狀體和蒼白球處出現，并在隔區(qū)有少量的表達。SPR陽性細胞著色較淺，開始在延髓中縫出現致密的SPR陽性纖維與細胞分布，并在嗅腦、隔區(qū)以及下丘腦有表達，濃染的陽性細胞數量較少，胞體較大呈梭形和三角形，并伴密集且淡染的陽性纖維。 E15，SP

6、陽性細胞在嗅腦、嗅球、隔區(qū)、梨狀皮質和斜角帶有較強的陽性著色，新紋狀體、蒼白球和伏核也有陽性表達，腦橋區(qū)有三叉神經運動核陽性著色。在這一時期SPR的表達和SP有一定的一致，也在嗅球、隔區(qū)、梨狀皮質、海馬、杏仁核和新紋狀體有陽性表達，延髓則分布更廣，在延髓中縫及腹側被蓋核有表達，核內陽性細胞數量較少，陽性纖維密集且淡染。 E17，觀察到存在從腳內核與終紋床核相鄰處發(fā)出一支SP陽性細胞束，經內囊和蒼白球內側進入紋狀體，陽性細胞濃染，

7、胞體較大，多呈圓形或梭形，同時伴有大量陽性終末，杏仁內側核也存在大量SP陽性終末。SP陽性表達還見于海馬和齒狀回。SPR陽性細胞和纖維在蒼白球和新紋狀體區(qū)域同樣可見，與SP不同的是其陽性著色主要見于纖維。SPR陽性纖維還可見于杏仁核與腹側丘腦及下丘腦外側，在延髓分布于中縫，如中縫背核和藍斑，中央灰質和中央上核。 E19，SP陽性表達又有增多，在腳內核、Forel區(qū)和丘腦后方出現較多SP陽性終末，從杏仁核發(fā)出的纖維索同樣可見，沿內

8、囊投射至蒼白球神經上皮和紋狀體室管膜下區(qū)，并伴有一定量終末；SP在延髓中縫表達增多，主要見于上丘，中腦導水管周圍灰質，中縫網狀結構，下橄欖核，腹側被蓋核和藍斑。SPR陽性則主要見于上丘腦、韁核、腳內核、中央灰質周圍，在背側被蓋核及腳間核也有一定表達。 P0，SP陽性細胞見于下丘腦，腳內核、紋狀體、杏仁核和未定帶，胞體濃染且與大量陽性終末共存。在延髓中縫網狀核，中縫背核也有SP表達。SPR陽性則主要見于中縫中央灰質及腹側被蓋核，陽

9、性胞體的數量較少，但可見密集而深染的陽性纖維,SPR還在杏仁核，紋狀體外側與伏核有一定表達?？偨Y結果見表1和表2。2.Westernblotting結果 SP從E11就開始有少量表達，并逐漸開始增多，在E15，E17增加明顯，直到出生；SPR也從E11開始有表達，直至出生都有穩(wěn)定的表達。 [結論] 1.P物質(SP)在胚胎發(fā)育早期的新紋狀體等處就有表達，P物質受體(SPR)則開始在延髓中縫有明顯表達； 2