PI3K p85α與大腸癌侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.pdf

1、大腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，對(duì)人類(lèi)的生命和健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。在全球范圍內(nèi)，大腸癌的年發(fā)病人數(shù)超過(guò)50萬(wàn)，發(fā)病率居第三位，在男性中僅次于胃癌和肺癌，在女性中僅次于乳腺癌。近幾年，隨著我國(guó)環(huán)境及飲食習(xí)慣的改變和人口的老齡化，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。大腸癌最具特征性的是常發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，這嚴(yán)重影響大腸癌患者的健康和療效。因此與大腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的因素已經(jīng)成為眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)，不僅有利于發(fā)現(xiàn)大腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理，而且還能為臨床診治、藥物篩

2、選及預(yù)后判斷提供新的依據(jù)，具有巨大的臨床價(jià)值和社會(huì)意義。
　　第一部分
　　大腸癌細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性研究
　　【研究目的】
　　比較不同表達(dá)PI3K p85α蛋白的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480之間體外轉(zhuǎn)移能力的差異。
　　【研究方法】
　　本課題負(fù)責(zé)人前期的研究證明PI3K p85α蛋白在大腸癌細(xì)胞株LoVo中的表達(dá)明顯高于SW480，以大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480為研究對(duì)象，采用異

3、質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)和遷移實(shí)驗(yàn)確定兩個(gè)細(xì)胞株之間體外黏附和遷移能力的差異。驗(yàn)證PI3K p85α表達(dá)的高低與大腸癌細(xì)胞體外轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性。
　　【結(jié)果】
　　1.異質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)顯示：
　　大腸癌細(xì)胞株LoVo的黏附能力明顯高于大腸癌細(xì)胞株SW480。
　　2.遷移實(shí)驗(yàn)顯示：
　　大腸癌細(xì)胞株LoVo的遷移能力明顯高于大腸癌細(xì)胞株SW480。
　　【結(jié)論】
　　1.PI3K p85α蛋白表達(dá)量較高的大腸癌細(xì)

4、胞株LoVo的黏附能力高于PI3K p85α蛋白表達(dá)量較低的大腸癌細(xì)胞株SW480。
　　2.PI3K p85α蛋白表達(dá)量較高的大腸癌細(xì)胞株LoVo的遷移能力高于PI3K p85α蛋白表達(dá)量較低的大腸癌細(xì)胞株SW480。
　　3.大腸癌細(xì)胞的體外黏附能力和遷移能力與PI3K p85α蛋白表達(dá)量的高低具有相關(guān)性。PI3K p85α蛋白表達(dá)量高的體外黏附能力和遷移能力較強(qiáng)。
　　第二部分
　　PI3K p85α慢病毒

5、干擾載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
　　【研究目的】
　　構(gòu)建PI3K p85α慢病毒干擾載體，轉(zhuǎn)染大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480，建立缺失表達(dá)PI3K p85α的大腸癌細(xì)胞株LoVo和 SW480。
　　【研究方法】
　　采用課題申請(qǐng)人已經(jīng)證明有效的RNA干擾系列，構(gòu)建PI3K p85α重組干擾載體并篩選、鑒定及擴(kuò)增。行慢病毒干擾載體感染。最后用增殖實(shí)驗(yàn)及Western-Blot檢測(cè)PI3K p85α的干擾效果。
　

6、　【結(jié)果】
　　1.干擾后大腸癌細(xì)胞株 LoVo和 SW480的增殖能力較未干擾的細(xì)胞株明顯減弱。
　　2.干擾后Western-Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大腸癌細(xì)胞株 LoVo和SW480中PI3K p85α的表達(dá)明顯降低。
　　【結(jié)論】
　　1.成功構(gòu)建PI3Kp85α慢病毒干擾載體，其能在體外高效轉(zhuǎn)染大腸癌細(xì)胞。
　　2.PI3Kp85α慢病毒干擾載體成功轉(zhuǎn)染大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480，建立穩(wěn)定缺失表達(dá)P

7、I3K p85α蛋白的大腸癌細(xì)胞株，達(dá)到體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的要求。
　　3.靶向PI3Kp85α的RNA干擾技術(shù)可以序列特異性地抑制大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480中PI3K p85α蛋白的表達(dá)，在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)大腸癌的增殖起到了明顯的抑制作用。
　　第三部分
　　PI3K p85α表達(dá)的變化對(duì)大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480體外侵襲和遷移的影響。
　　【研究目的】
　　通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證P

8、I3K p85α表達(dá)變化對(duì)大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480體外遷移和侵襲的影響。
　　【研究方法】
　　利用慢病毒干擾載體轉(zhuǎn)染成功的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480為實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染空載體的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480及未轉(zhuǎn)染載體的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。在體外行腫瘤細(xì)胞的劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)。研究不同表達(dá)PI3K p85α蛋白的細(xì)胞株之間的轉(zhuǎn)移能力的差異。
　　【結(jié)果】
　　1.劃

9、痕實(shí)驗(yàn)顯示：
　　轉(zhuǎn)染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480向劃痕中心遷移的距離明顯少于陰性轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480。而陰性轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480的向劃痕中心遷移的距離無(wú)明顯差別。
　　2.遷移實(shí)驗(yàn)顯示：
　　轉(zhuǎn)染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480的遷移能力明顯低于陰性轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480。而陰性轉(zhuǎn)染和未

10、轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株LoVo和SW480的遷移能力無(wú)明顯差別。
　　3.侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：
　　轉(zhuǎn)染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細(xì)胞株 LoVo和 SW480的侵襲 Matrigel基底膜能力和遷移能力明顯低于陰性轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株 LoVo和 SW480。而陰性轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的大腸癌細(xì)胞株 LOVO和 SW480的侵襲 Matrigel基底膜能力和遷移能力無(wú)明顯差別。
　　【結(jié)論】
　　1.PI3K p85