B10細(xì)胞與重癥肌無力臨床及美羅華治療反應(yīng)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:美羅華即利妥昔單抗(rituximab)的治療是針對(duì)CD20抗原產(chǎn)生作用，并有效地耗竭表達(dá)CD20的B細(xì)胞前體和成熟的B細(xì)胞。當(dāng)這些B細(xì)胞被清除后，B細(xì)胞可以再生。應(yīng)用美羅華治療難治性重癥肌無力MG(myasthenia gravis，MG)方法可以為我們?cè)贛G患者中觀察B10細(xì)胞亞群提供了一個(gè)機(jī)會(huì)，我們研究MG患者的臨床嚴(yán)重程度和狀態(tài)用美國重癥肌無力協(xié)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)即MGFA(Myasthenia Gravis Associati

2、on of American Scores，MGFA)進(jìn)行評(píng)定，確定患者血液單核淋巴細(xì)胞中分泌IL-10的B細(xì)胞出現(xiàn)的頻率，并進(jìn)一步研究B10細(xì)胞在MG患者的動(dòng)力學(xué)變化，同時(shí)與健康對(duì)照者相比較。確定重癥肌無力患者分泌IL-10的B細(xì)胞即是B10細(xì)胞亞群的特征，發(fā)現(xiàn)B10細(xì)胞在重癥肌無力患者體內(nèi)變化的特點(diǎn)，它與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，并且確定這種細(xì)胞在患者接受美羅華治療前后的變化特點(diǎn)，進(jìn)一步與健康對(duì)照者進(jìn)行比較。從而確定這類B10細(xì)胞在MG

3、患者中的特征表現(xiàn)，并評(píng)價(jià)其與疾病活躍程度及美羅華治療前后的B10細(xì)胞的消耗程度，為的是尋找一個(gè)在MG患者中與疾病活躍程度和對(duì)免疫治療反應(yīng)的標(biāo)記。研究B細(xì)胞特別是B10細(xì)胞在自主免疫疾病特別是重癥肌無力的診斷、疾病狀態(tài)的觀察與免疫治療效果等方面的變化特點(diǎn)，從而為MG的診斷、治療、疾病控制程度等領(lǐng)域的理論和實(shí)踐丌辟了新的途徑。
　　方法:48例符合研究條件的MG患者被納入研究，外周血的單核細(xì)胞(PeripheralBlood Mono

4、nuclear Cells，PBMCS)從MG患者及健康對(duì)照組患者外周血中分離出來，其中有22例MG患者對(duì)傳統(tǒng)的治療效果反應(yīng)差而成為難治性MG患者，對(duì)這22例難治性的MG患者給予正規(guī)的持續(xù)1.5年的美羅華治療。確定為難治性重癥肌無力的標(biāo)準(zhǔn)是指患者繼往至少使用兩種免疫抑制劑，并且其中一種是糖皮質(zhì)激素，或至少在繼往使用的免疫抑制劑中有一種是強(qiáng)的松，但是治療效果不滿意。每個(gè)患者接受四次美羅華的靜脈注射治療，每周一次，每次劑量是375mg/m2

5、。分別在試驗(yàn)開始時(shí)、3-4個(gè)月、8-9個(gè)月和15-16個(gè)月四個(gè)點(diǎn)抽取患者外周血同時(shí)獲取健康對(duì)照組的外周血，并用流式細(xì)胞技術(shù)(FACS)將表面帶有CD19，CDld，CD5，CD24，CD38的抗原和分泌IL-10的B細(xì)胞亞群分選出來，監(jiān)測(cè)不同臨床亞型MG患者和接受美羅華治療的MG患者體內(nèi)這些B細(xì)胞的表達(dá)水平和變化特點(diǎn)。并且與健康對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:與健康人群對(duì)比發(fā)現(xiàn)CD19+的分泌IL-10的B細(xì)胞數(shù)量在MG患者中減低，這

6、種分泌IL-10的B細(xì)胞多數(shù)共同表達(dá)CD5和CDld或CD24和CD38，而在重癥肌無力患者中按MGFA評(píng)價(jià)后得分高的患者產(chǎn)IL-10的B細(xì)胞的數(shù)量減低。與健康對(duì)照組相比，MG患者體內(nèi)的B10細(xì)胞多數(shù)表達(dá)CD5和CDld或是CD24和CD38。MG患者血中B10細(xì)胞的含量越低;患者的MGFA分?jǐn)?shù)越高，B10細(xì)胞亞群在重癥肌無力患者血液中的水平減低越明顯。進(jìn)一步顯示對(duì)美羅華反應(yīng)良好的重癥肌無力患者顯示出快速B細(xì)胞特別是B10細(xì)胞的再生能力

7、，而對(duì)美羅華治療反應(yīng)不良的重癥肌無力患者，其B10細(xì)胞的再生速度延遲。我們觀察到MG患者對(duì)美羅華治療反應(yīng)良好者顯示B細(xì)胞能夠針對(duì)治療快速反應(yīng)分泌IL-10而對(duì)反應(yīng)不佳者，B細(xì)胞反應(yīng)延遲。
　　結(jié)論:重癥肌無力患者血液單核細(xì)胞中的B10細(xì)胞與疾病的進(jìn)程和階段發(fā)展有相關(guān)性，并且B10細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)變化與美羅華治療重癥肌無力的反應(yīng)相關(guān)。我們認(rèn)為能夠分泌IL-10的CD5+ CDld+CD24+CD38+B的B細(xì)胞亞群可以作為MG患者疾病活