膜表達(dá)熱休克蛋白和膜型超抗原突變體雙重修飾瘤苗的抗腫瘤作用的研究.pdf

1、該課題研究目標(biāo)為:通過(guò)基因轉(zhuǎn)染使HSP70表達(dá)于小鼠黑色素瘤B16的細(xì)胞膜上;同時(shí)通過(guò)蛋白轉(zhuǎn)染法,將突變的SEA-TM錨定于瘤細(xì)胞膜上,制備細(xì)胞膜表面雙重修飾的瘤苗并研究其抗腫瘤作用和機(jī)理.研究?jī)?nèi)容包括:(1)構(gòu)建HSP70的膜表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后,篩選并擴(kuò)增陽(yáng)性克隆,制成HSP70膜表面表達(dá)的單修飾瘤苗;(2)將帶有跨膜序列的超抗原SEA-TM用PCR方法定點(diǎn)突變,構(gòu)建成其膜型超抗原突變體SEA-TM<,D227A>的原核表達(dá)載體

2、,進(jìn)一步表達(dá)并制備膜型超抗原突變體蛋白.(3)將膜型超抗原突變體蛋白錨定于HSP70膜表面表達(dá)的腫瘤細(xì)胞上,制成雙重膜表面修飾的瘤苗;(4)在小鼠移植瘤模型上,分別使用單一和雙重膜修飾瘤苗,觀察瘤苗的抗腫瘤作用.結(jié)論：該課題證明了膜表達(dá)表達(dá)HSP70的瘤苗比胞漿表達(dá)HSP70的瘤苗誘導(dǎo)更強(qiáng)的抗腫瘤免疫;SEA-TM突變體錨定的瘤苗有更好的應(yīng)用效果.在此基礎(chǔ)上，根據(jù)HSP和超抗原的特性設(shè)計(jì)并制備了HSP70和超抗原雙重修飾的瘤苗，有著諸多

3、的創(chuàng)新：（1）利用超抗原的非特異免疫活化來(lái)促進(jìn)熱休克蛋白的特異性抗腫瘤免疫，獨(dú)特地建立了一種聯(lián)系特異性免疫和非特異性免疫的抗腫瘤方法.這是該課題主要的創(chuàng)新點(diǎn).結(jié)果表明這種策略是合理的，有明顯的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng).（2）進(jìn)一步地，建立了一種獨(dú)特的瘤苗細(xì)胞表面修飾策略：膜表達(dá)表達(dá)熱休克蛋白與膜型超抗原錨定的瘤苗細(xì)胞表面雙重修飾.證明了這種瘤苗細(xì)胞表面雙重修飾有著更好的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng).這也是該課題重要的創(chuàng)新點(diǎn).（3）該研究獨(dú)特地對(duì)雙重修飾中的膜型