貓棒束孢菌絲粉對實(shí)驗(yàn)性腎功能衰竭大鼠的保護(hù)作用.pdf

1、急性腎功能衰竭和慢性腎功能衰竭病情復(fù)雜、治療棘手,嚴(yán)重地危害人類的健康和生命,也給社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),迫切需要新的、有效的治療手段在發(fā)病早期即可抑制原發(fā)病對腎臟的進(jìn)一步損傷,盡可能挽救殘余腎臟功能,延緩腎衰竭的發(fā)生。
　　冬蟲夏草是我國傳統(tǒng)的天然名貴藥用真菌,對腎臟組織有一定的保護(hù)和修復(fù)作用,臨床上多用于腎臟疾病的治療。但是,由于天然冬蟲夏草非常稀有,一般多用從天然冬蟲夏草中分離得到的菌種經(jīng)人工培養(yǎng)獲得的菌絲體代替,如百令膠

2、囊、金水寶膠囊等。
　　貓棒束孢是從天然冬蟲夏草蟲草體中分離得到的一株真菌,經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所郭英蘭教授鑒定為Isaria felina(DC.:Fr.)Fr.,是一株新的冬蟲夏草菌種,已被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(保藏號:CGMCC NO.0706)。貓棒束孢作為從冬蟲夏草蟲草體中分離得到的菌種,我們假想其發(fā)酵菌絲粉可能具有類似冬蟲夏草的保護(hù)腎臟的功能。因此我們對貓棒束孢菌絲粉進(jìn)行了腎臟保護(hù)功能的實(shí)驗(yàn)

3、研究,以驗(yàn)證傳統(tǒng)中醫(yī)理論的正確性,同時(shí)也為貓棒束孢菌絲粉的臨床應(yīng)用研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本文主要研究了貓棒束孢菌絲粉對實(shí)驗(yàn)性急性腎功能衰竭和慢性腎功能衰竭大鼠的防治作用效果,并對貓棒束孢的培養(yǎng)條件、貓棒束孢菌絲粉的毒理學(xué)、以及貓棒束孢菌絲粉保護(hù)腎臟的作用機(jī)理進(jìn)行了初步的探討,具體內(nèi)容如下。
　　(1)貓棒束孢的傳代培養(yǎng)及液體培養(yǎng)工藝條件的確定
　　將貓棒束孢在固體培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)10 d左右,選擇生長良好的粗壯菌絲體

4、收集于凍存管中,并在液氮罐中進(jìn)行保藏。
　　對貓棒束孢的液體發(fā)酵工藝進(jìn)行初步的探索,經(jīng)過對培養(yǎng)基、培養(yǎng)基裝量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間等因素的考察,我們確定了貓棒束孢菌絲的最佳發(fā)酵工藝:培養(yǎng)基組成為蛋白胨0.6％,酵母膏1.2%,蔗糖2.4%,硫酸鎂0.05%,磷酸二氫鉀0.1%,并用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)整pH為6.5左右;將500 mL培養(yǎng)基裝于3000 mL三角瓶中,0.15 MPa高壓滅菌40 min,冷卻后接入貓棒束孢菌種,置于1

5、80 r·min-1搖床上,于26.5℃溫度條件下旋轉(zhuǎn)發(fā)酵培養(yǎng)48 h。
　　(2)貓棒束孢菌絲粉的毒理學(xué)研究
　　為了明確貓棒束孢菌絲粉的用藥安全性,分別對貓棒束孢菌絲粉進(jìn)行了急性毒性研究和長期毒性研究。
　　在急性毒性研究中選擇昆明種小鼠為受試動物,由于無法測得貓棒束孢菌絲粉的半數(shù)致死量,因此在實(shí)驗(yàn)中采用最大給藥劑量法驗(yàn)證其急性毒性,測得昆明小鼠對貓棒束孢菌絲粉的最大給藥劑量為30 g·kg-1,其結(jié)果大約相當(dāng)于臨

6、床擬用劑量的900倍,說明貓棒束孢菌絲粉無急性毒性,具有良好的安全性。
　　在長期毒性試驗(yàn)中選用 Wistar大鼠為受試動物,實(shí)驗(yàn)分別觀察連續(xù)灌胃給予貓棒束孢菌絲粉0.833 g·kg-1、1.65 g·kg-1和3.33 g·kg-112 w對大鼠的毒性作用。給藥期間各貓棒束孢菌絲粉給藥組大鼠生長狀態(tài)良好,未見異常反應(yīng),未出現(xiàn)中毒癥狀及動物死亡,因此貓棒束孢菌絲粉對Wistar大鼠的無毒劑量為3.33 g·kg-1(約相當(dāng)于臨床

7、擬用劑量的100倍)。
　　毒理學(xué)研究結(jié)果表明, IFMP對實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠沒有明顯的毒性作用,具有較好的安全性。
　　(3)貓棒束孢菌絲粉對甘油誘導(dǎo)的急性腎功能衰竭大鼠的防治作用研究
　　采用后肢雙側(cè)肌肉注射甘油(50%,V/V)的方法建立急性腎功能衰竭動物模型,對Wistar大鼠肌肉注射50%甘油8 mL·kg-1后血清尿素氮和血清肌酐顯著升高,腎小管嚴(yán)重?cái)U(kuò)張,管腔有大量蛋白管型,表明模型的建立是成功的。
　　

8、200 mg·kg-1貓棒束孢菌絲粉可顯著降低甘油所致血清尿素氮和血清肌酐的升高,并明顯減輕腎臟組織的病理改變,從而減輕甘油對大鼠造成的腎損害,提示貓棒束孢菌絲粉在200 mg·kg-1劑量下對甘油致大鼠急性腎衰具有防治作用。
　　貓棒束孢菌絲粉能降低血漿內(nèi)皮素-1含量和血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1含量,其對急性腎功能衰竭大鼠的防治作用可能與其降低血漿內(nèi)皮素-1含量和血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1含量有關(guān)。
　　(4)貓棒束孢菌絲粉對腺嘌

9、呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭大鼠的保護(hù)作用研究
　　對SD大鼠連續(xù)灌胃給予100 mg·(kg·d)-1腺嘌呤30 d成功建立了慢性腎功能衰竭動物模型。貓棒束孢菌絲粉在200 mg·kg-1劑量下可顯著降低腎功能衰竭大鼠血清尿素氮、肌酐、尿酸含量,提高腎功能衰竭大鼠內(nèi)生肌酐清除率,延緩慢性腎功能衰竭的進(jìn)程;貓棒束孢菌絲粉還有利于改善慢性腎功能衰竭病情進(jìn)展中常見的貧血癥狀。
　　貓棒束孢菌絲粉對實(shí)驗(yàn)性慢性腎功能衰竭大鼠腎臟功能的改善