遺傳性脆性X綜合征的細(xì)胞與分子遺傳學(xué)檢測(cè)分析.pdf

1、目的：脆性X綜合征(Fragile X Syndrome，F(xiàn)XS)是僅次于唐氏綜合征的發(fā)病率較高的一種遺傳性智力低下疾病，為不完全顯性X連鎖遺傳病，其發(fā)病機(jī)制是因?yàn)槊撗跞塑账岽?lián)重復(fù)拷貝數(shù)大大增加所致，主要表現(xiàn)為智力低下。由于在青春期前兒童的臨床表現(xiàn)無特異性，主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室診斷。目前常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法都有不足之處，本研究希望建立一套準(zhǔn)確、快速、廉價(jià)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)FXS的方法。
　　 方法：采用細(xì)胞遺傳學(xué)與分子遺傳學(xué)相結(jié)合的方法

2、。細(xì)胞遺傳學(xué)方法：首先對(duì)130例樣本的外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過加入5-Fdu誘導(dǎo)脆性位點(diǎn)的表達(dá)，每個(gè)樣本鏡下分析100個(gè)中期細(xì)胞，計(jì)數(shù)X染色體脆性位點(diǎn)的表達(dá)情況，脆性位點(diǎn)表達(dá)率≥4％為陽性；PCR結(jié)合甲基化特異性PCR（MS-PCR）的分子遺傳學(xué)方法：對(duì)上述130例樣本的外周血提取基因組DNA，首先對(duì)所有男性和女性樣本都進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增FMRⅠ基因(CGG)n重復(fù)序列，對(duì)不能有效擴(kuò)增的男性樣本和所有女性樣本再進(jìn)行MS-PCR，用亞

3、硫酸氫鈉對(duì)基因組DNA進(jìn)行修飾，非甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶保持不變，以修飾后的DNA為模板,用兩套不同的引物對(duì)（甲基化特異性引物對(duì)和非甲基化特異性引物對(duì)）擴(kuò)增FMRⅠ基因的(CGG)n重復(fù)序列區(qū)，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小判斷突變類型。
　　 結(jié)果：對(duì)130個(gè)疑似病例的外周血細(xì)胞遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：有4例X染色體脆性位點(diǎn)檢出率≥4％（分析100個(gè)細(xì)胞，脆性位點(diǎn)≥4）。建立了PCR結(jié)合MS-PCR方法，測(cè)序表明，常規(guī)PC

4、R擴(kuò)增產(chǎn)物為(CGG)n重復(fù)序列；經(jīng)亞硫酸氫鈉修飾后，未甲基化的(CGG)n重復(fù)轉(zhuǎn)變?yōu)?CAA)n重復(fù)序列，甲基化的(CGG)n重復(fù)轉(zhuǎn)變?yōu)?CGA)n重復(fù)序列。并利用該方法對(duì)130個(gè)臨床疑似病例進(jìn)行分析，130個(gè)疑似病例基因組DNA常規(guī)PCR都能有效擴(kuò)增FMRⅠ基因(CGG)n重復(fù)序列，產(chǎn)物的(CGG)n重復(fù)數(shù)都在13-46p之間。
　　 結(jié)論：建立了用PCR結(jié)合MS-PCR檢測(cè)FXS的方法。該方法能同時(shí)檢測(cè)到FMRⅠ基因(CG