遺傳性脆性X綜合征的細胞與分子遺傳學檢測分析.pdf

1、目的：脆性X綜合征(Fragile X Syndrome，F(xiàn)XS)是僅次于唐氏綜合征的發(fā)病率較高的一種遺傳性智力低下疾病，為不完全顯性X連鎖遺傳病，其發(fā)病機制是因為脫氧三核苷酸串聯(lián)重復拷貝數(shù)大大增加所致，主要表現(xiàn)為智力低下。由于在青春期前兒童的臨床表現(xiàn)無特異性，主要依據(jù)實驗室診斷。目前常用的實驗室診斷方法都有不足之處，本研究希望建立一套準確、快速、廉價的實驗室檢測FXS的方法。
　　 方法：采用細胞遺傳學與分子遺傳學相結合的方法

2、。細胞遺傳學方法：首先對130例樣本的外周血淋巴細胞進行培養(yǎng)，通過加入5-Fdu誘導脆性位點的表達，每個樣本鏡下分析100個中期細胞，計數(shù)X染色體脆性位點的表達情況，脆性位點表達率≥4％為陽性；PCR結合甲基化特異性PCR（MS-PCR）的分子遺傳學方法：對上述130例樣本的外周血提取基因組DNA，首先對所有男性和女性樣本都進行常規(guī)PCR擴增FMRⅠ基因(CGG)n重復序列，對不能有效擴增的男性樣本和所有女性樣本再進行MS-PCR，用亞

3、硫酸氫鈉對基因組DNA進行修飾，非甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶保持不變，以修飾后的DNA為模板,用兩套不同的引物對（甲基化特異性引物對和非甲基化特異性引物對）擴增FMRⅠ基因的(CGG)n重復序列區(qū)，根據(jù)擴增產(chǎn)物片段大小判斷突變類型。
　　 結果：對130個疑似病例的外周血細胞遺傳學分析發(fā)現(xiàn)：有4例X染色體脆性位點檢出率≥4％（分析100個細胞，脆性位點≥4）。建立了PCR結合MS-PCR方法，測序表明，常規(guī)PC

4、R擴增產(chǎn)物為(CGG)n重復序列；經(jīng)亞硫酸氫鈉修飾后，未甲基化的(CGG)n重復轉(zhuǎn)變?yōu)?CAA)n重復序列，甲基化的(CGG)n重復轉(zhuǎn)變?yōu)?CGA)n重復序列。并利用該方法對130個臨床疑似病例進行分析，130個疑似病例基因組DNA常規(guī)PCR都能有效擴增FMRⅠ基因(CGG)n重復序列，產(chǎn)物的(CGG)n重復數(shù)都在13-46p之間。
　　 結論：建立了用PCR結合MS-PCR檢測FXS的方法。該方法能同時檢測到FMRⅠ基因(CG