宮縮及仿宮縮全身預(yù)處理的保護(hù)作用和機(jī)制初步研究.pdf

1、背景：新生兒窒息、心腦血管意外等是發(fā)生于臨床的常見疾病，其病理生理改變均為缺氧復(fù)氧(缺血再灌注)損傷，因此缺氧復(fù)氧損傷機(jī)制和防治研究長(zhǎng)期受到醫(yī)學(xué)研究者的關(guān)注。 目前對(duì)缺氧缺血損傷防治研究依然受到以下條件的限制：①已經(jīng)建立并廣泛使用的新生動(dòng)物模型不能完全模擬臨床新生兒窒息的改變；②雖然缺氧/缺血預(yù)處理是目前公認(rèn)的最有效防治缺氧/缺血損傷的方法，由于安全性、有效性、可行性仍存在爭(zhēng)議，因此不能應(yīng)用于臨床。③缺氧/缺血預(yù)處理保護(hù)機(jī)制并不

2、清楚。 自然分娩過程中，宮縮使子宮壁間血管閉合，導(dǎo)致胎兒反復(fù)短時(shí)間缺氧，與缺氧預(yù)處理具有明顯的相似性，自然分娩新生兒抗缺氧能力也強(qiáng)于剖宮產(chǎn)，提示：①宮縮具有缺氧預(yù)處理保護(hù)作用；②模擬宮縮對(duì)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)處理可能兼有安全、有效的特點(diǎn)。 目的：①以新西蘭兔建立與臨床類似的新生兒窒息模型；②比較不同方式分娩的新生兔的缺氧耐受能力，并研究分娩宮縮的缺氧預(yù)處理保護(hù)機(jī)制；③模擬宮縮造成胎兒間斷缺氧的特點(diǎn)對(duì)成年兔實(shí)施預(yù)處理(即仿宮縮預(yù)處理

3、)，研究這種仿生理的動(dòng)物全身缺氧預(yù)處理的安全性、有效性及可能機(jī)制。 方法：將空氧混合儀改為空／氮混合儀，以取得0～21％之間任意需要的氧濃度，用于以下實(shí)驗(yàn)：①新生兒窒息模型的建立：將新生兔放入透明密閉容器，持續(xù)輸入4％氧氣中30分鐘，休息1小時(shí)后取心、肺、腦、肝、腎做病理切片；②自然分娩對(duì)新生兔的保護(hù)作用：將孕兔分為自然分娩組和剖宮產(chǎn)組，利用已建立的新生兒窒息模型對(duì)不同方式分娩的新生兔進(jìn)行缺氧損傷處理，觀察缺氧過程中動(dòng)物行為學(xué)變

4、化，心、肺、腦、肝、腎的光鏡下病理改變，大腦C-fos蛋白的表達(dá)等；③仿宮縮預(yù)處理對(duì)成年兔的保護(hù)作用：將成年新西蘭兔分為C組(對(duì)照組，鎮(zhèn)靜后不實(shí)施預(yù)處理)、TP組(傳統(tǒng)預(yù)處理組，缺氧濃度為7％，持續(xù)36秒，復(fù)氧3.3分，重復(fù)3小時(shí))和MLPC組(仿宮縮預(yù)處理組，8％氧30秒，空氣復(fù)氧4.5分→7％氧35秒，空氣復(fù)氧3.5分→6％氧40秒，空氣復(fù)氧2.5分，每濃度梯度持續(xù)處理1小時(shí)，共3小時(shí))。將處理后的三組動(dòng)物以5％的氧通氣15分鐘，使

5、之產(chǎn)生缺氧復(fù)氧損傷。監(jiān)測(cè)處理前后生命、血?dú)庾兓?，并以Elisa法測(cè)定血漿NO濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，HE染色觀察各器官病理改變，免疫組化法測(cè)定大腦C-fos蛋白的表達(dá)，RT-PCR法測(cè)定肺泡活性蛋白Sp-A、Sp-B的mRNA轉(zhuǎn)錄。 結(jié)果： ①以4％氧氣30分鐘能夠使新生兔產(chǎn)生行為異常和腦、肺、心、肝、腎等器官的損傷，特征與臨床新生兒窒息十分相似。 ②兩組動(dòng)物經(jīng)歷4％氧氣30分鐘后，病理切片顯示各器官均有損傷，

6、但自然分娩組較剖宮產(chǎn)組輕；出生即刻自然分娩組C-fos陽(yáng)性細(xì)胞率明顯高于剖宮產(chǎn)組(10.20±2.44vs 6.1±1.52，P<0.05)，而缺氧復(fù)氧損傷后，自然分娩組明顯低于剖宮產(chǎn)組(14.5±1.51 vs 20.1±2.96.P<0.05)。 ③仿宮縮預(yù)處理對(duì)成年兔的影響：預(yù)處理期：與TP組比較，MLPC組動(dòng)物生命體征平穩(wěn)，血液pH、BE穩(wěn)定，組織攝氧量下降、血漿NO升高。缺氧期：以5％氧氣缺氧15分鐘，C組1只、TP

7、組2只、MLPC組1只死亡，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；三組動(dòng)物的pH、PaC02、Sa02和Pa02均顯著低于其它時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)，組間比較：MLPC組動(dòng)物Pa02、Sa02、血漿NO濃度、攝氧量高于C組和TP組。復(fù)氧1小時(shí)后：除C組外，其它兩組動(dòng)物血液pH、BE均恢復(fù)正常；MLPC組和TP組PaO2、攝氧量、組織含水量均低于C組，MLPC組最低，組織病理切片也顯示，MLPC組損傷最輕；RT-PCR顯示，MLPC組Sp-A、Sp-B的mRN

8、A顯著高于C組和TP組(p<0.05)，血漿NO濃度也高于C組和TP組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： ①以4％氧氣使新生兔缺氧30分鐘后，所建立的模型在病因、病生、病理改變等方面與臨床新生兒窒息十分相似。 ②分娩宮縮能誘導(dǎo)即刻早期基因如c-fos的少量表達(dá)，從而啟動(dòng)內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，在發(fā)生相同程度缺氧時(shí)，能減輕各器官的損傷，抑制c-fos蛋白的過度表達(dá)。 ③模擬宮縮對(duì)成年兔實(shí)施預(yù)處理能誘導(dǎo)出確切的保護(hù)作用。與傳