TGF-β及Smad4在大鼠卵圓細(xì)胞不同增殖階段的表達(dá)及意義.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：大鼠肝卵圓細(xì)胞的誘導(dǎo)增殖、分離及性質(zhì)鑒定
　　 目的：建立大鼠卵圓細(xì)胞增殖模型，分離、鑒定卵圓細(xì)胞。
　　 方法：采用肝毒性藥物2-AAF灌胃加肝部分切除誘導(dǎo)大鼠卵圓細(xì)胞增殖。術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)采用改良的膠原酶灌注消化、Percoll密度梯度離心法分離純化卵圓細(xì)胞，以免疫組化、RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光、Western Blotting等方法鑒定卵圓細(xì)胞；觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)卵圓細(xì)胞

2、的增殖變化。
　　 結(jié)果：分離不同增殖階段的細(xì)胞，免疫組化，RT-PCR，細(xì)胞免疫熒光，Western Blotting檢測(cè)顯示細(xì)胞表達(dá)肝細(xì)胞及膽管上皮細(xì)胞標(biāo)志物AFP、ALB、OV-6、CK-19等。術(shù)后12天，細(xì)胞增殖呈峰值。
　　 結(jié)論：2-AAF+肝部分切除可誘導(dǎo)大鼠卵圓細(xì)胞增殖，術(shù)后12天細(xì)胞增殖呈峰值。
　　 第二部分：TGF-β及smad4在大鼠卵圓細(xì)胞不同增殖階段的表達(dá)及意義
　　 目的：

3、檢測(cè)TGF-β及Smad4在大鼠卵圓細(xì)胞不同增殖階段的表達(dá)及意義。
　　 方法：利用以上建立的大鼠卵圓細(xì)胞增殖模型所獲得的卵圓細(xì)胞，運(yùn)用免疫組化，RT-PCR和Western Blotting的方法檢測(cè)卵圓細(xì)胞不同增殖階段的TGF-β及Smad4的mRNA和蛋白水平的表達(dá)并探討其意義。
　　 結(jié)果：TGF-βmRNA和蛋白水平在術(shù)后12天，也就是在卵圓細(xì)胞的增殖高峰時(shí)，表達(dá)量顯著下降，隨后在卵圓細(xì)胞的癌變過(guò)程中是逐步升高

4、的，P<0.05。Smad4則自術(shù)后12天起開(kāi)始升高，但自腫瘤在12周形成后，其表達(dá)水平又是逐步下降的，P<0.05。
　　 結(jié)論：TGF-β抑制肝臟干細(xì)胞也就是卵圓細(xì)胞的增殖，但隨著卵圓細(xì)胞的增殖減慢，TGF-β又能夠表達(dá)增加誘導(dǎo)其向其他細(xì)胞分化，而Smad4自卵圓細(xì)胞增殖高峰到腫瘤形成早期階段，是起抑制腫瘤作用的。因此，深入研究TGF-β及其下游中介分子Smad4可能為卵圓細(xì)胞向腫瘤分化的研究提供理論依據(jù)，并對(duì)新型靶向治療指