ICR小鼠腎臟晝夜節(jié)律的存在及其存在意義.pdf

1、本文分兩個部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：ICR小鼠腎臟晝夜節(jié)律的表達(dá)
　　目的：本部分實驗通過對小鼠進(jìn)行黑箱干預(yù)后，觀察晝夜節(jié)律基因Bmal1、Clock、隱色素基因Cry1-2、周期基因Per1-2及鐘控基因DBP、Rev-erbα和Rev-erbβ在小鼠腎臟中的表達(dá)情況，探討ICR小鼠腎臟組織晝夜節(jié)律的存在。
　　方法：1、制作通氣性良好的黑箱子，采用遮光布嚴(yán)格避光；
　　2、選擇24只出生3個月左右的ICR

2、小鼠，稱量小鼠的體重，盡可能要求實驗鼠體重相近，大小相差不超過3g，放入黑箱中給予足夠飲食和水分，小鼠在黑箱中生活72小時后，每間隔4個小時隨機取出2只小鼠，脫頸處死后取腎臟組織放入液氮中保存；
　　3、提取mRNA，將mRNA定量取3ug逆轉(zhuǎn)錄稀釋至300ul，用普通PCR檢測目的基因是否表達(dá)，用RT-PCR檢測Clock、Bmal1、Cry1、Cry2、Per1、Per2和Dbp等晝夜節(jié)律基因的具體表達(dá)情況；
　　4、收

3、集并整理經(jīng)上述處理得到的數(shù)據(jù)，使用GraphPad統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖及分析。
　　結(jié)果：以β-action作為內(nèi)參基因，可以觀察到Bmal1、Cry1、Cry2、DBP、Rev-erbα、Rev-erbβ、Per1隨著時間的推移表達(dá)呈現(xiàn)高低起伏的趨勢，而Clock及周期基因Per2未看到明顯的晝夜節(jié)律擺動。
　　結(jié)論：晝夜節(jié)律基因及鐘控基因在ICR小鼠的腎臟的均有表達(dá)，并且晝夜節(jié)律基因的表達(dá)量隨時間的變化而發(fā)生規(guī)律的表達(dá)

4、。
　　第二部分：臨床腎臟病人尿蛋白排泄量的節(jié)律變化
　　目的：本部分實驗通過對臨床三種不同腎臟疾病患者不同時間點尿蛋白排泄量變化的觀察，探討不同病理類型腎臟病患者蛋白尿的排泄量情況及其與腎臟病變程度的關(guān)系。
　　方法：1、根據(jù)臨床病人住院信息，選擇肌酐正常，24h尿蛋白大于3.5g，且腎臟穿刺病理提示輕微病理改變的患者3例，慢性腎功能不全的患者及尿毒癥患者各3例；
　　2、收集以上患者早晨7點—8點、下午4點—

5、5點之間的尿液，采用肌酐試劑盒進(jìn)行肌酐測定，采用同一肌酐上樣量的尿液進(jìn)行尿蛋白電泳，染色并脫色后觀察其尿蛋白變化；
　　3、收集并整理經(jīng)上述處理得到的數(shù)據(jù)，使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：輕微病變病人尿蛋白排泄量早晨低于下午，腎功能不全的病人尿蛋白排泄量上午與下午未見明顯差異，尿毒癥尿蛋白排泄量早晨高于下午。
　　結(jié)論：腎臟尿蛋白排泄量存在節(jié)律變化，腎臟病理類型為輕微病變患者尿蛋白排泄量上