人卵子體外成熟中超微結構及細胞凋亡與卵子發(fā)育潛能關系的研究.pdf

1、該工作主要對IVM中培養(yǎng)前后的卵子及胚胎進行評分,并評估所采用的評分標準;通過對卵子周圍的卵丘細胞凋亡狀況進行檢測,探討卵丘細胞的凋亡程度與卵母細胞發(fā)育潛能的關系,以期根據(jù)卵子和胚胎形態(tài)學評分及卵丘細胞凋亡檢測結果選擇移植胚胎,提高體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization pre-embryo transfer,IVF-ET)的臨床妊娠率.研究了光鏡下形態(tài)良好與較差的卵母細胞的超微結構,并檢測了其相應的卵丘細胞的

2、凋亡率,總結了人卵母細胞充分成熟的超微結構特征及發(fā)育不良卵子的超微結構變化,為確定人卵母細胞體外成熟和體外受精最佳時期提供形態(tài)學資料,同時試圖揭示人卵母細胞體外成熟過程中異常發(fā)育的形態(tài)學變化,希望能為卵母細胞發(fā)育調控機理方面的研究提供形態(tài)學資料.一、為了更好的指導臨床工作,制定了"改良式人未成熟卵母細胞評分標準",對IVM中所取卵子進行培養(yǎng)前和培養(yǎng)后兩次評分,同時記錄卵子受精情況及胚胎發(fā)育情況,進行胚胎評分.統(tǒng)計資料表明,我們采用的卵子

3、及胚胎評分標準具有可行性,即評分差的卵子發(fā)育潛能不良;評分好的卵子發(fā)育潛能良好,對臨床具有指導意義.二、對卵丘細胞凋亡率進行檢測,首次系統(tǒng)評價了卵丘細胞凋亡率與卵子發(fā)育潛能之間的關系.1.用H.E染色、DAPI染色和TUNEL檢測對卵丘細胞的凋亡進行形態(tài)學研究,分辨正常卵丘細胞和凋亡卵丘細胞.統(tǒng)計卵丘細胞的凋亡率,并用SPSS分析軟件進行統(tǒng)計學分析.分析結果表明,卵丘細胞凋亡率高的卵母細胞發(fā)育潛能差,卵丘細胞凋亡率低的卵母細胞發(fā)育潛能好

4、,移植并妊娠的卵母細胞其卵丘細胞凋亡率最低.從卵丘細胞凋亡率的統(tǒng)計結果來看,用胚胎評分標準分類比用卵子評分標準分類更能反應卵母細胞的發(fā)育潛能.故結合形態(tài)學標準與卵丘細胞凋亡情況,選擇可移植的胚胎,能夠提高移植胚胎的妊娠率.2.按卵子評分標準將卵子分為兩類:一類為優(yōu)質卵子,另一類為不良卵子,分別提取其卵丘細胞的DNA,進行瓊脂糖凝膠電泳.結果表明:優(yōu)質卵子卵丘細胞凋亡程度輕,不良卵子的卵丘細胞其DNA在電泳時形成特征性的DNAladder