展青霉素完全抗原的合成及多克隆抗體的制備.pdf

1、展青霉素（Patulin, PAT）是曲霉、青霉和絲衣霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，對(duì)動(dòng)物有致畸、致突變和致癌性，如何及時(shí)、快速有效的檢測(cè)出食品中展青霉素的殘留成為國(guó)內(nèi)外研究的方向。展青霉素的檢測(cè)方法有薄層色譜法、氣相-質(zhì)相聯(lián)機(jī)色譜法、液相色譜法等，由于免疫檢測(cè)法具有方便快捷、成本低等優(yōu)點(diǎn)，成為展青霉素檢測(cè)研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)對(duì)展青霉素進(jìn)行修飾，利用碳二亞胺法制備出PAT的完全抗原后，制備出了展青霉素的多克隆抗體，并對(duì)其抗體進(jìn)行了鑒定。為建立

2、展青霉素的免疫檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)為了增加PAT和載體蛋白的聯(lián)接的效率，首先通過(guò)用丁二酸酐將PAT加以修飾以增加其羧基，生成PAT的衍生物（PAT-HS），并通過(guò)氣相-質(zhì)相聯(lián)機(jī)加以簽定；同時(shí)對(duì)作為載體蛋白的牛血清白蛋白（BSA）也采用乙二胺進(jìn)行修飾以增加其氨基（EDA-BSA）。然后EDA-BSA與載體蛋白卵清白蛋白（OVA）分別與PAT-HS連接得到免疫抗原（PAT-HS-EDA-BSA）和檢測(cè)抗原（PAT-HS-OVA）

3、。 將制備好的免疫抗原PAT-HS-EDA-BSA免疫小鼠，每隔14d加免1次，從第3次加強(qiáng)免疫后開(kāi)始，加免后第8d，尾靜脈采血測(cè)定抗血清效價(jià)。達(dá)到一定效價(jià)后，眼球采全血，分離抗血清。采用辛酸-硫酸銨法純化抗血清，應(yīng)用間接ELISA法測(cè)定抗PAT多克隆抗體的效價(jià)和抗原的最佳工作濃度，抗血清的效價(jià)為1：40000，抗原的最佳工作濃度為0.5 ug/mL?？贵w的特異性也通過(guò)間接ELISA法得到充分的證明。 本研究以抗PAT多