CD97、CD55在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)和siRNA對(duì)CD97基因的沉默效應(yīng).pdf

1、第一部分 CD97、CD55在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其和胃癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的關(guān)系 目的:系統(tǒng)地檢測(cè)CD97和CD55基因和蛋白在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平及各胃癌細(xì)胞株的遷移和侵襲能力,探尋CD97和CD55基因和蛋白表達(dá)水平和胃癌細(xì)胞株的遷移、侵襲能力之間的關(guān)系. 方法:采用231 31、AGS、BGC823、KATO-Ⅲ、MGC803和SGC79016種胃癌細(xì)胞株.RT-PCR檢測(cè)CD97mRNA不同異構(gòu)體和cd55m

2、RNA的表達(dá),免疫熒光流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD97EGF和CD97stalk和cd55蛋白的表達(dá),用細(xì)胞遷移和侵襲試驗(yàn)研究各胃癌細(xì)胞株的遷移和侵襲能力. 結(jié)果:CD97EGF三種異構(gòu)體mRNA、CD97TM7 mRNA以及CD55mRNA在各胃癌細(xì)胞株L}J均有不同程度的表達(dá),但相互之間在各細(xì)胞株中的表達(dá)強(qiáng)弱沒(méi)有相關(guān)性(P>0.05).CD97EGF和stalk抗原和CD55抗原在各胃癌細(xì)胞株中均有不同程度的表達(dá),CD97EGF抗原

3、和stalk抗原的表達(dá)強(qiáng)度有相火性(r=i.000,P<0.001),CD97EGF、stalk抗原和CD55抗原之間在表達(dá)強(qiáng)度上均沒(méi)有相關(guān)性(p>0.05).MGC803細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)最多,KATO-Ⅲ細(xì)胞的遷移和侵袋細(xì)胞數(shù)最少,各胃癌細(xì)胞株的遷移和轉(zhuǎn)移細(xì)胞數(shù)存在著一定的相關(guān)性(r=0.943.P=0.005).CD97EGF抗原、stalk抗原的表達(dá)強(qiáng)度和細(xì)胞的遷移和侵襲能力有著很強(qiáng)的相關(guān)性(p<0.05),CD55抗原在表

4、達(dá)比例和強(qiáng)度上和細(xì)胞的遷移和侵襲能力均沒(méi)有相關(guān)性. 結(jié)論:CD97和CD55基因和蛋白在各胃癌細(xì)胞株中均有不同程度的表達(dá),CD97EGF抗原、stalk抗原的表達(dá)強(qiáng)度和細(xì)胞的遷移和侵襲能力有著很強(qiáng)的相關(guān)性. 第二部分siRNA干擾CD97的表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響 目的:設(shè)計(jì)合成有效的siRNA-CD97,體外轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株,觀察 CD97表達(dá)改變及其和胃癌細(xì)胞株遷移、侵襲能力改變的關(guān)系,進(jìn)一步明確

5、CD97在胃癌細(xì)胞牛長(zhǎng)、分化、遷移和侵袋能力上的作用. 方法:采用AGS和MGC803種胃癌細(xì)胞株.針對(duì)CD97基岡設(shè)計(jì)siRNA,采用化學(xué)法合成,篩選出最有效的CD97-siRNA.CD97-siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后48小時(shí)用Real time PCR檢測(cè)CD97mRNA表達(dá)的改變,72小時(shí)用免疫熒光流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD97蛋白表達(dá)的改變,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的改變,并用細(xì)胞遷移和侵襲試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株遷移和侵襲能力的變化.

6、 結(jié)果:在siRNA-CD97轉(zhuǎn)染后48 h,Real time PCR結(jié)果顯示對(duì)于AGS和MGGC803,CD97mRNA的表達(dá)量相對(duì)于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別下降了(89.34±9.95)﹪和(95.42±1.93)﹪.轉(zhuǎn)染后72h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示對(duì)于AGS,CD97EGF和CD97stalk抗原的表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別下降了(19.29±3.45)﹪和(30.11±5.93)﹪,對(duì)于MGC803,CD97EGF和CD

7、97stalk抗原的表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)于未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別下降了(26.25±5.73)﹪和(16.22±3.23)﹪.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞吸光度值的差異沒(méi)有顯著性.遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)于AGS,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染組遷移和侵襲細(xì)胞相對(duì)于未轉(zhuǎn)染組分別下降了(67.63±12.03)﹪和(68.02±15.63)﹪,對(duì)于MGC803,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染組遷移和侵襲細(xì)胞相對(duì)于未轉(zhuǎn)染組分別下降了(14.