rAAV-CEA轉(zhuǎn)染CD誘導(dǎo)CTL希傷胃癌細(xì)胞株BCG-803的研究.pdf

1、目的: 近年來，惡性腫瘤發(fā)病率不斷地增高，嚴(yán)重危害著人類健康。據(jù)統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤，胃癌排名第4位[1]，手術(shù)、化療及放療三大常規(guī)治療效果差，遠(yuǎn)期生存率低，因此，如何提高治療效果，改善患者的生活質(zhì)量，預(yù)防胃癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移是目前研究的熱點之一。伴隨著免疫學(xué)理論以及分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，人們對腫瘤與免疫系統(tǒng)之間的關(guān)系的深刻認(rèn)識，腫瘤免疫治療越來越引起人們的重視。其中過繼性細(xì)胞免疫療法(Adoptive cell immunoth

2、erapy，ACI)中的細(xì)胞毒T細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)因殺瘤譜廣、殺瘤活性高、增殖能力強、特異性高等特點成為焦點。
　　 本研究旨在探討表達(dá)癌胚抗原的重組腺相關(guān)病毒(rAAV/CEA)轉(zhuǎn)染DC生成的CTL對胃癌細(xì)胞株的殺傷作用，為腫瘤治療提供新的技術(shù)方法。
　　 方法:
　　 1.取健康人外周血，F(xiàn)icoll分離液分離淋巴細(xì)胞，將獲得的貼壁細(xì)胞(DC)分為2組:第1組加入rA

3、AV/CEA病毒液;第2組加PBS液。兩組細(xì)胞均加入GM-CSF、rhIL-4、TNF-α誘導(dǎo)其生長、成熟。兩組成熟DC按1∶20與效應(yīng)T細(xì)胞混合培養(yǎng)，誘導(dǎo)生成CTL。
　　 2.FAM檢測CEA轉(zhuǎn)染率、成熟DC表型、CTL亞群比例、CTL體外殺傷率。
　　 3.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，對所取得的數(shù)據(jù)進行分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.倒置顯微鏡觀察，培養(yǎng)2-3d后

4、貼壁細(xì)胞由圓形逐漸變?yōu)椴灰?guī)則形，體積逐漸變大;5d后，細(xì)胞體積變得更大，表面有大量長短不一，毛刺狀突起，呈現(xiàn)典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)。
　　 2.轉(zhuǎn)染組DC高水平表達(dá)CD86和CD40(96.37±2.08％，89.53±1.79％);未轉(zhuǎn)染組則為81.95±2.64％、67.96±2.88％，組間差異明顯(P＜0.01）。
　　 3.轉(zhuǎn)染組CEA表達(dá)率95.25±2.41％，未轉(zhuǎn)染組表達(dá)較低，兩組差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜

5、0.05)。
　　 4.DC與原始T細(xì)胞共培養(yǎng)，倒置顯微鏡下可見T細(xì)胞形成大小不等的集落。
　　 5.轉(zhuǎn)染組CTL表面標(biāo)志CD8+T，CD8+/CD4+的表達(dá)比例分別為87.12±2.30％，14.87±2.48％;而對照組的表達(dá)比例分別為70.17±2.12％、9.82±1.99％。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6.轉(zhuǎn)染組誘導(dǎo)CTL對BCG-803胃癌細(xì)胞株的殺傷率隨著E/T比例(20∶1，40∶

6、1，80∶1)的增加而逐漸增高，且殺傷率顯著高于PBS組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.rAAV/CEA轉(zhuǎn)染DC，獲得成熟DC細(xì)胞，倒置顯微鏡觀察與未轉(zhuǎn)染組DC相比形態(tài)無明顯差異。
　　 2.rAAV/CEA轉(zhuǎn)染的DC細(xì)胞，CEA陽性細(xì)胞率為95.25±2.41％，此結(jié)果說明CEA在DC前體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)良好。
　　 3.rAAV/CEA-DC高表達(dá)CD86、CD40與未轉(zhuǎn)染組DC有明顯差異。