編碼AFP、AFP-CTLA4肝癌DNA疫苗的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠抗腫瘤免疫的實驗研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文編碼AFP、AFP-CTLA4肝癌DNA疫苗的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠抗腫瘤免疫的實驗研究姓名：田耕申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：易繼林20040501華中科技大學(xué)同濟醫(yī)掌院 博士研究生學(xué)位·滄支在衄液中終生以很低的水平存在。由于對經(jīng)胸腺陰性選擇后體內(nèi)是否仍然存在抗A F P的T 細胞存有疑慮，致使以A F P 結(jié)構(gòu)本身作為肝癌生物治療靶點的設(shè)想，一贏未能付諸實施。隨著對A F P 基因結(jié)

2、構(gòu)及功能進一步研究以及基于其在H C C 高效特異表達，近年認為A F P 完全有可能被利用作為抗H C C 治療的有效靶向途徑。近來，關(guān)于甲胎蛋白( A F P ) 免疫顯性表位的研究解決了肝癌免疫治療的第一個問題。B u t t e r f i e l d 等人最近發(fā)現(xiàn)人A F P 存在四個特殊的表位：h A F P l 3 7 —1 4 5 ( P L F Q V P E P V ) ，h A F P l 5 8 —1 6 6 (

3、 F M N K F I Y E I ) ，h A F P 3 2 5 —3 3 4 ( G L S P N u ⅥR F L ) 和h A F P 5 4 2 - - 5 5 0 ( G V A L Q T M K Q ) ，這四個表位經(jīng)加工與H I A —A 2 l 結(jié)合后能夠被人T 細胞識別，并能分別誘導(dǎo)培養(yǎng)的人T 細胞和H L A - A 2 1 轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生A F P 特異性的C r L 。另外還發(fā)現(xiàn)，盡管小鼠A F P 終

4、生存在( 甚至高于人的水平) ，其免疫系統(tǒng)也能夠產(chǎn)生針對此癌胚抗原的T 細胞免疫。以上的研究說明A F P 能夠作為肝癌免疫治療的靶的，但是其免疫原性較弱，不能誘導(dǎo)強的特異性的免疫應(yīng)答，這也是大多數(shù)腫瘤免疫治療所面臨的問題，是發(fā)展合理的腫瘤免疫治療方案的第二個主要的障礙。為了增強腫瘤疫苗的免疫原性，人們嘗試了各種各樣的方法。利用抗M H C 、F - e r R 、3 3 D I 或細胞表面I g 的抗體將抗原靶向各種A P C 細胞能

5、明顯地提高抗體應(yīng)答。通過將抗原與附R 、I P l 0 、M C P - 3 、L - s e l e c t i n 或C n A 4連接能夠使抗原更有效地被A P C 細胞攝取。C E A 為一種與A F P 相似的癌胚抗原，用編碼C E A _ C D 4 0 配體三聚體融合蛋白的質(zhì)粒D N A 疫苗免疫人C E A 轉(zhuǎn)基因小鼠后，T 蜘胞對人C E A 的免疫耐受被打破，并產(chǎn)生了有效的針對小鼠結(jié)腸癌的保護性免疫。細胞毒性T 淋巴

6、細胞抗原4 ( C y t o l y t i c T l y m p h o c y t e a s s o c i a t e da n t i g e n 4 ，C 1 1A 4 )是一種表達于活化T 細胞表面的糖蛋白，其配體為B 7 一I ( C D 8 0 ) 和B 7 - 2 ( C D B 6 ) 分子，而B 7 - 1 ( C D 8 0 ) 和B 7 —2 ( C D B 6 ) 主要表達于抗原呈遞細胞( A P C

7、) 的表面。C T T L A 4 與B 7 - 1和B 7 —2 的結(jié)合為T 細胞完全活化提供協(xié)同刺激信號。C T l A 4 與B 7 - i 和B 7 —2 有很強的結(jié)合力，遠遠大于T 細胞表面的另一分子一c D 2 8 。C 1 1A 4 為同源二聚體，其單體亦能與B 7 結(jié)合。融合蛋白C T L A 4 - 1 9 曾作為免疫抑制劑用在移植和自身免疫疾病動物模型上。本實驗旨在構(gòu)建表達A F P - C T L A 4 融合蛋白