昭通天麻DNA條形碼研究及藥用成分分析.pdf

1、天麻（Gastrodia elata Bl.）隸屬于蘭科(Orchidaceae)、蘭亞科(Subfam.Orchidoideae)、樹蘭族(Trib.Epidendreae)、天麻亞族（Subtrib.Gastrodiinae）天麻屬(Gastrodia R.Br.)腐生草本植物，無根無綠葉，與蜜環(huán)菌(Armillaria mellea(Vahl ex Fr.) Karst.)共生。天麻以塊莖入藥，是主產(chǎn)于我國(guó)的名貴中藥，在我國(guó)已有兩

2、千余年的用藥歷史?！吨袊?guó)植物志》記載天麻屬在我國(guó)分布有13種，昭通地區(qū)所分布的主要為天麻（G.elataBl.）的4個(gè)變型，即紅天麻（G.elataBl.f.elata）、綠天麻(G.elata Bl.f.viridis Makino)、烏天麻(G.elata BI.f glaucaS.Chow)、黃天麻(G.elata Bl.fflavidaS.Chow)。本文綜合應(yīng)用了形態(tài)學(xué)、DNA條形碼技術(shù)和化學(xué)成分分析等手段和方法對(duì)昭通天麻黃、

3、綠、烏3個(gè)變型的分類進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴天麻的形態(tài)分類研究。昭通天麻植物形態(tài)特征差異明顯，從株高、花色、莖稈顏色以及塊莖表型性狀可直觀對(duì)天麻3個(gè)變型——烏天麻、黃天麻、綠天麻進(jìn)行形態(tài)分類。3個(gè)變型天麻塊莖表型性狀具有一定程度的多樣性。烏天麻個(gè)體較大，與黃天麻和綠天麻差異明顯，且烏天麻遺傳變異穩(wěn)定，可作為栽培天麻的優(yōu)質(zhì)種源。天麻塊莖各表型性狀變型間變異大于變型內(nèi)變異，從這個(gè)意義上來說，變型間變異是天麻的主要變異

4、來源;天麻藥材由于經(jīng)過加工炮制，3個(gè)變型之間的藥材形態(tài)特征已經(jīng)很接近，形態(tài)鑒別困難。
　　 ⑵昭通天麻的DNA條形碼研究。分析比較了ITS、matK、rbcL、trnH-psbA、trnL-F五個(gè)DNA條形碼候選序列在天麻不同變型內(nèi)和變型間的鑒別效果，并對(duì)組合片段ITS+rbcL的鑒定效果進(jìn)行了評(píng)估。在天麻ITS、rbcL、matK和trnH-psbA基因中，僅ITS和rbcL得到擴(kuò)增，但變型內(nèi)變型間沒有明顯的barcoding

5、 gap，上述通用條碼不適合作為昭通天麻種下變型DNA條形碼的研究，但是ITS序列可作為不同居群天麻的分子鑒別研究;葉綠體基因片段rbcL和trnH-psbA的成功擴(kuò)增，推測(cè)天麻葉綠體仍未退化完全。從ITS序列分析得出，黃天麻與烏天麻親緣關(guān)系最近，其次是綠天麻與黃天麻，烏天麻與綠天麻親緣關(guān)系最遠(yuǎn);天麻ITS序列在變型內(nèi)和變型間大部分個(gè)體變異較小，僅有少部分個(gè)體變異較大，變異主要發(fā)生在ITS1區(qū);就變型內(nèi)來說，綠天麻的遺傳變異最大，烏天麻

6、和黃天麻遺傳變異較小，烏天麻和黃天麻遺傳穩(wěn)定，有利于天麻的遺傳育種。昭通天麻與貴州大方天麻的親緣關(guān)系較近，而與陜西漢中天麻的親緣關(guān)系卻相對(duì)較遠(yuǎn)，不同來源相同變型天麻的ITS序列差異明顯，而相同來源不同變型間的ITS序列同源性較高。天麻共生菌不是單一的蜜環(huán)菌(Armillaria mellea(Vahl ex Fr.) Karst.），大部分是蜜環(huán)菌屬(Armillaria spp.)的其他種，各蜜環(huán)菌種與各變型天麻的共生并非一一對(duì)應(yīng)關(guān)系

7、。天麻共生菌可能還含有小菇屬（Mycena）真菌，但是未發(fā)現(xiàn)有小菇屬真菌紫萁小菇（Myeena osmundieola Lange）存在。
　　 ⑶昭通天麻藥用成分研究。經(jīng)HPLC檢測(cè)，各變型天麻天麻素含量:干品烏天麻＞鮮品紅天麻＞鮮品黃天麻＞鮮品綠天麻＞鮮品烏天麻;對(duì)羥基苯甲醇含量:鮮品綠天麻＞鮮品紅天麻＞鮮品黃天麻＞鮮品烏天麻＞干品烏天麻;腺苷含量:鮮品紅天麻＞干品烏天麻＞鮮品黃天麻＞鮮品烏天麻＞鮮品綠天麻;對(duì)羥基苯甲醛含量