茜草藥材DNA條形碼鑒定及HPLC分析研究.pdf

1、茜草為常用中藥，味苦，性寒，歸肝、心經(jīng)，具有涼血止血，行血祛瘀，止咳祛痰等功效，臨床上用于治療吐血，崩漏，外傷出血，經(jīng)閉瘀阻，關(guān)節(jié)痹痛，跌撲腫痛等。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，名“茜根”，《中國(guó)藥典》（2010年版一部）收載的茜草的來(lái)源為茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根莖。由于藥材形態(tài)特征相似，因此在市場(chǎng)上，常有其他科屬的植物根或根莖作為茜草藥材的混偽品使用。因此，本文主要針對(duì)茜草基原鑒定和質(zhì)量分析進(jìn)行研究，為

2、《中國(guó)藥典》茜草DNA條形碼數(shù)據(jù)庫(kù)提供標(biāo)準(zhǔn)序列，對(duì)保證其臨床用藥的準(zhǔn)確性和有效性具有重要意義。
　　目的：
　　1.建立茜草及其混偽品的DNA條形碼鑒定方法；
　　2.對(duì)市售茜草藥材進(jìn)行HPLC的含量測(cè)定和指紋圖譜研究。方法：
　　1.采用psbA-trnH、matK和rbcL序列及其組合序列的DNA條形碼技術(shù)對(duì)茜草藥材進(jìn)行基原鑒定；
　　2.以HPLC法對(duì)茜草藥材進(jìn)行指紋圖譜研究，以羥基茜草素和大葉茜草素

3、為對(duì)照品，對(duì)茜草藥材進(jìn)行的含量測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　1. psbA-trnH+matK+rbcL組合序列能夠鑒定茜草及其混偽品。茜草的76份基原樣品DNA均能成功提取，psbA-trnH+matK+rbcL組合序列鑒定效果最好，種內(nèi)K2P遺傳距離為0-0.0014，種間K2P遺傳距離0.0007-0.6303；NJ樹顯示茜草能與其混偽品茜草屬其他8個(gè)物種以及紫金牛、丹參、川赤芍、蓬子菜明顯區(qū)分。市場(chǎng)購(gòu)買的30份茜草藥材中，

4、22份樣品能成功擴(kuò)增3個(gè)基因片段，采用NJ樹分析，其中11份樣品與茜草聚為一支，剩余樣品分別聚為單獨(dú)3支，為茜草屬其它物種。
　　2.對(duì)茜草及其地方習(xí)用品進(jìn)行了HPLC含量測(cè)定。對(duì)11批正品茜草藥材含量測(cè)定，結(jié)果顯示羥基茜草素的含量為0.14％-0.46%，大葉茜草素的含量為0.16%-0.44%；11批茜草地方習(xí)用品羥基茜草素的含量為0.27%-0.50%，大葉茜草素的含量為0.11%-0.32%。茜草與其地方習(xí)用品的羥基茜草素

5、和大葉茜草素的含量差異較小。
　　3.建立了茜草藥材的HPLC指紋圖譜。茜草藥材指紋圖譜確定12個(gè)特征峰，11批正品茜草與對(duì)照?qǐng)D譜相似度為0.947-0.992。11批茜草地方習(xí)用品與對(duì)照?qǐng)D譜相似度為0.805-0.961。茜草地方習(xí)用品S17、S18樣品相似度分別為0.961、0.960大于正品茜草最小相似度0.947。
　　結(jié)論：
　　1.初步建立了以psbA-trnH+matK+rbcL組合序列作為茜草藥材的DN