石斛、北豆根、肉桂的DNA條形碼鑒定及鐵皮石斛葉綠體基因組研究.pdf

1、DNA條形碼自提出以來，經(jīng)過十余年的發(fā)展，技術(shù)體系日漸成熟，在中藥鑒定方面的應(yīng)用也越來越廣泛。本研究對石斛、北豆根、肉桂及其混偽品進行DNA條形碼鑒定研究，并結(jié)合鐵皮石斛葉綠體基因組進行了珍稀瀕危石斛屬DNA條形碼序列篩選研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)考察ITS2序列對石斛屬40種、173份樣品的鑒定能力，結(jié)果表明本研究設(shè)計的DOF/R引物可以實現(xiàn)鐵皮石斛藥材ITS2序列的擴增和測序，石斛屬ITS2序列種內(nèi)變異小于種間變異，

2、鑒定效率為75.72％和61.27％（BLAST和NearestDistance方法），能實現(xiàn)對石斛屬大部分物種的準(zhǔn)確鑒定。
　　完成鐵皮石斛葉綠體基因組二代測序、物理圖譜繪制，基因組結(jié)構(gòu)特征解析，基因功能分類，密碼子使用情況及微衛(wèi)星序列分布等，結(jié)合已公布的蘭科葉綠體基因組，篩選分子鑒定候選序列。結(jié)果發(fā)現(xiàn)petA-psbJ和psbK-psbI序列種間變異大，種內(nèi)相對保守，可以實現(xiàn)物種的準(zhǔn)確區(qū)分，可作為分子鑒定的候選DNA條形碼序列

3、。
　　根據(jù)葉綠體基因組分析結(jié)果，對17種石斛的34份樣品進行psbK-psbI序列擴增，驗證psbK-psbI序列對石斛屬的鑒定能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)psbK-psbI序列在石斛屬內(nèi)的擴增效率和測序效率均為100％，且psbK-psbI序列在石斛屬種內(nèi)保守，種間變異明顯，能夠區(qū)分石斛屬內(nèi)物種。
　　(2)應(yīng)用ITS2和psbA-trnH序列對北豆根及其混偽品共49份樣品進行鑒定研究，其中包括16份藥材市場中收集的商品藥材。結(jié)果表明

4、所有樣品均成功提取DNA，ITS2和psbA-trnH擴增效率均為100％，測序效率分別為100％、76.5％，鑒定效率均為100％，NJ樹結(jié)果顯示能夠區(qū)分北豆根藥材及其混偽品;所有商品藥材經(jīng)鑒定均為正品。因此，ITS2和psbA-trnH序列可以對北豆根藥材及其混偽品進行鑒定，是保障用藥安全和維護藥材市場規(guī)范的有力手段。
　　(3)基于psbA-trnH序列對肉桂及混偽品共59份樣品進行鑒定研究。結(jié)果表明肉桂psbA-trnH序