百合中活性成分的提取、純化及測(cè)定研究.pdf

1、百合球莖屬于百合科，包括幾百個(gè)品種，如風(fēng)信子，郁金香和洋蔥，在中國(guó)廣泛種植，且價(jià)格低廉，可作為食物和觀賞用，百合球莖多糖在腸道(尤其在大腸)的消化吸收功能非常重要，可以防止一些疾病。所以人們將百合多糖提取出來進(jìn)行研究。 本論文的研究成果主要有以下幾部分： (1)用回流提取、液液萃取、柱層析和有溶劑分步沉淀等方法，從百合中制備了多糖粗提出物。確定了多糖的最優(yōu)提取條件。采用優(yōu)于傳統(tǒng)回流提取的超聲波輔助提取，以蒸餾水為溶劑，在

2、400W下浸提40min，料液比為1:10，多糖得率達(dá)1.373％；并對(duì)超聲波輔助提取機(jī)理進(jìn)行了探討。 (2)分別探討了多糖、皂苷、蛋白質(zhì)的測(cè)定方法。采用苯酚—硫酸法結(jié)合DNS法對(duì)多糖進(jìn)行測(cè)定，確定了最佳檢測(cè)條件：總糖含量與吸光度值在0.0～73.0 μ g／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；單糖含量與吸光度值在0.40～2.00mg／mL范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。采用改進(jìn)的考馬斯亮藍(lán)法分析測(cè)定了多糖中蛋白質(zhì)的含量，線性回歸方程A=0.012

3、38+1.07179x， R=0.9997。 (3)研究了采用酶—Sevag聯(lián)用法去除多糖中的蛋白質(zhì)，確定了最佳清除條件：酶解溫度60℃，酶解時(shí)間4h，1.0mg／mL的木瓜蛋白酶0.5ml，反應(yīng)pH值6.0；試驗(yàn)結(jié)果表明，酶—SeVag聯(lián)用法萃取三次后，殘留蛋白質(zhì)含量?jī)H為1.22％，清除率高達(dá)89.29％。在提取純化工業(yè)中，引入大孔吸附樹脂技術(shù)，對(duì)樹脂種類、吸附條件進(jìn)行了研究。靜態(tài)吸附結(jié)果表明X-5、NKA-9和AB-8樹脂

4、的吸附量分別為24.23，39.21和33.06；以乙醇為洗脫劑，X-5、NKA-9和AB-8樹脂的洗脫率分別為77％，97.3％，91.9％。靜態(tài)實(shí)驗(yàn)表明XNKA-9樹脂具有較好的吸附解吸性能。動(dòng)態(tài)洗脫中采用梯度洗脫方式，結(jié)果表明在95％的乙醇洗脫下，多糖純度可達(dá)93.2％。 (4)采用DEAE一纖維素柱和Sephadex G—200為柱填料，通過離子交換層析進(jìn)一步分離純化百合多糖。層析柱尺寸為：20×500mm，試驗(yàn)裝置簡(jiǎn)單

5、，吸附及洗脫易于進(jìn)行。DEAE-纖維素柱上，通過NaCl溶液梯度洗脫，透析后再用乙醇沉淀后得到了兩種百合多糖精品LPl、L22。經(jīng)Sephadex G—200柱進(jìn)一步分離，證實(shí)都為均一組份。對(duì)所得兩種多糖精品的理化性質(zhì)及純度進(jìn)行了研究，并由紫外和紅外光譜分析結(jié)果對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步表征。 (5)探討了百合多糖和皂苷的連續(xù)提取工藝，研究了從百合中同時(shí)得到多糖和皂苷的提取工藝。采用先醇提后水提的方法，確定了適合的乙醇濃度、提取次數(shù)和濃