百合內(nèi)生真菌抑菌活性的研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物各種組織和器官內(nèi)部的真菌。內(nèi)生真菌的次生代謝物在病蟲害的生物防治、醫(yī)藥工業(yè)上的用途和范圍逐漸增大，由于其物種豐富，數(shù)量龐大，而且與其他生物之間具有緊密的生態(tài)關(guān)系，使其成為活性物質(zhì)的豐富來源，因而引起人們的廣泛關(guān)注，成為目前研究的熱點(diǎn)之一。近年來有很多研究表明，百合的提取物對(duì)細(xì)菌和真菌均有一定程度的抑制效果，由于植物內(nèi)生真菌與寄主植物有復(fù)雜的關(guān)系，因此從百合中分離到具有抗菌活

2、性的內(nèi)生真菌的可能性非常大。
　　 本文分離百合球莖根組織中的內(nèi)生真菌，篩選其中具有抗菌活性的菌株BH-3。以對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌圈直徑作為響應(yīng)值，采用單因素實(shí)驗(yàn)法對(duì)BH-3的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成進(jìn)行優(yōu)化，包括最適生長(zhǎng)溫度、培養(yǎng)基初始pH、接種量、裝液量、基礎(chǔ)培養(yǎng)基及其碳源、氮源。應(yīng)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選培養(yǎng)基組成的關(guān)鍵因子，得到優(yōu)化的培養(yǎng)基。以金黃色葡萄球菌為指示菌，對(duì)BH-3的發(fā)酵液進(jìn)行不同的pH、高溫、硫酸銨鹽析、

3、乙醇沉淀、環(huán)肽定性試驗(yàn)、超濾、紫外照射等處理，考察抗菌活性物質(zhì)的特性;將發(fā)酵液用硫酸銨沉淀得到的蛋白粗提物，經(jīng)過葡聚糖凝膠Sephadex-G100分子篩層析和DEAE葡聚糖凝膠A-50離子交換層析，進(jìn)行了分離純化，并對(duì)純化后的樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)，主要結(jié)果如下:
　　 1.從健康百合組織中分離得到3株內(nèi)生真菌，研究其發(fā)酵液對(duì)7種腐敗菌生長(zhǎng)的抑制作用，篩選到一株具有廣譜抗菌活性的菌株BH-3
　　 2.根據(jù)真

4、菌內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列對(duì)其進(jìn)行分子鑒定，確定其為尖孢鐮刀屬Fusariumoxysporum。
　　 3.在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的6個(gè)組分中，蛋白胨和磷酸二氫鉀的濃度對(duì)BH-3發(fā)酵產(chǎn)物的抗菌活性具有顯著的影響，分別具有負(fù)相關(guān)和正相關(guān)性。通過確定蛋白胨和磷酸二氫鉀的最佳濃度，得到優(yōu)化的培養(yǎng)基組成為葡萄糖15g/L，硫酸銨1g/L，蛋白胨6g/L，酵母膏1g/L，硫酸鎂0.6g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，VB10.03g/L。
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