堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系CAOV3蛋白激酶B和周期蛋白D的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系CAOV3蛋白激酶B和周期蛋白D的影響姓名：楊劍麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫黎光20040401實(shí)驗(yàn)材料與方法1 ．細(xì)胞培養(yǎng)：人卵巢癌細(xì)胞系C A O V 3 細(xì)胞在含1 0 ％小牛血清的R P M l 6 4 0 培養(yǎng)基，3 7 。C ，5 ％C O ：條件下培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行隨機(jī)分組。2 ．利用特異性識(shí)別磷酸化P K B

2、( S e r 4 7 3 ) 抗體進(jìn)行W e s t e r n 印跡雜交，檢測(cè)不同濃度b F G F 處理相同時(shí)間及是否采用P 1 3 K 特異性抑制劑W o r ! 一m a n n i n 預(yù)處理后，相同濃度b F G F 孵育不同時(shí)間點(diǎn)卵巢癌細(xì)胞P K B 的活性。3 ．特異性c y c l i nD 抗體進(jìn)行W e s t e r n 印跡雜交，檢測(cè)相同濃度b F G F 處理不同時(shí)間及是否采用W o r t m a n n

3、 i n 預(yù)處理后b F G F 對(duì)卵巢癌細(xì)胞c y c l i nD的表達(dá)的影響。4 ．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用S P S S l l ．5 軟件統(tǒng)計(jì)包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析( P < 0 ．0 5 為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)) 。結(jié) 果1 ．b F G F 對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系C A O V 3 的P K B 活性的影響：采取不同濃度的b F G F 與C A O V 3 共同孵育1 5 r a i n ，結(jié)果顯示7 5 n g ／m lb F G F 對(duì)P

4、 K B 活性的影響最顯著，是對(duì)照組的近2 倍。同時(shí)，以7 5 n g ／m lb F G F 與C A O V 3 共同孵育不同時(shí)間，P K B 活性在1 0 m i n 達(dá)到最高峰，為對(duì)照組的近1 3 ．7 4 倍。用P 1 3 K 特異性抑制劑W o r t m a r m i n 預(yù)處理細(xì)胞1 h 后，再施加b F G F 處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)預(yù)處理組P K B 的活性與未預(yù)處理組相比明顯下降，具有顯著性差異( P< 0 ．0

5、5 ) 。2 ．b F G F 對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系C A O V 3 的細(xì)胞周期蛋白D 表達(dá)水平的影響：以7 5 n g ／r n l 的b F G F 與C A O V 3 共同孵育不同時(shí)間，c y c l i nD 表達(dá)水平在8 h 達(dá)到最高峰。用W o m n a n n i n 預(yù)處理細(xì)胞1 h 后，再施加b F G F 處理，W o r t ．m a n n i n 預(yù)處理后在1 6 h 時(shí)間點(diǎn)c y c l i nD 表達(dá)水平