國產(chǎn)異氟醚(寧芬)對成年大鼠學(xué)習(xí)記憶功能影響的研究.pdf

1、第一部分國產(chǎn)異氟醚(寧芬)對成年大鼠行為學(xué)的影響
　　 目的：通過Morris水迷宮實驗，觀察成年雄性SD大鼠持續(xù)吸入國產(chǎn)異氟醚(寧芬)30min后的行為學(xué)變化，探討國產(chǎn)異氟醚是否與術(shù)后認(rèn)知功能障礙(POCD)的發(fā)生有關(guān)。
　　 方法：(1)成年雄性SD大鼠36只(N=6×6組)，隨機(jī)分為空白對照組(A組，即空氣組)、陽性對照組(O2組，即氧氣組)、麻醉組(T1、T2、T3、T4四個亞組，即異氟醚吸入30min蘇醒后2h

2、、1d、7d、14d組)。(2)異氟醚吸入前所有大鼠進(jìn)行Morris水迷宮定位航行適應(yīng)性訓(xùn)練5d，記錄逃避潛伏期和總路程(即大鼠從入水到爬上平臺所需的時間和運(yùn)行路程)；第6d行空間搜索實驗，記錄大鼠120s內(nèi)在平臺象限停留時間、平臺象限停留路程占總路程百分比、平均速度及經(jīng)過平臺次數(shù)。訓(xùn)練結(jié)束后，A組不進(jìn)行任何處理，O2組吸入純氧30min后與A組再次行水迷宮實驗，觀察指標(biāo)同適應(yīng)性訓(xùn)練；T1、T2、T3、T4組吸入2.0％濃度國產(chǎn)異氟醚(

3、寧芬)30min，記錄大鼠麻醉前、麻醉30min、麻醉完全蘇醒后的呼吸次數(shù)，待各組麻醉蘇醒后2h、1d、7d、14d再次行水迷宮實驗，觀察指標(biāo)同適應(yīng)性訓(xùn)練。
　　 結(jié)果：(1)大鼠麻醉前、麻醉30min、麻醉完全蘇醒后的呼吸次數(shù)(次/min)分別為83.0±7.1、63.3±10.4、83.8±5.0，麻醉30min呼吸次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(2)異氟醚吸入前5d水迷宮定位航行適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)果分別為：①逃

4、避潛伏期(s)為53.5±41.7、28.4±30.8、18.4±16.5、16.7±18.2、13.0±10.5；②總路程(cm)為1291.3±983.9、809.5±934.6、469.0±401.1、444.4±499.7、379.9±321.1。(3)異氟醚吸入前第6d各組空間搜索適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)果為：①平臺象限停留時間(s)為50.0±10.3、41.0±10.5、48.6±12.7、48.6±12.9、47.6±10.3、50

5、.1±8.0；②平臺象限停留路程占總路程百分比(％)為35.5±5.7、28.0±6.8、38.6±5.4、32.4±9.5、33.6±4.9、37.5±4.7；③平均速度(cm/s)為19.5±5.8、23.4±3.7、23.8±1.9、23.2±3.6、24.2±3.4、25.3±1.9；④經(jīng)過平臺次數(shù)(次)為1.7±1.0、1.8±1.7、2.8±2.0、2.2±1.6、1.7±1.2、2.8±1.9。與第1d比較，第2、3、4、

6、5d逃避潛伏期、總路程結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且隨著天數(shù)的增加逐漸縮短。與O2組比較，T1和T4組平臺象限停留路程占總路程百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(4)異氟醚吸入后Morris水迷宮實驗結(jié)果分別為：①逃避潛伏期(s)為11.2±6.6、11.0±9.6、12.0±14.5、24.8±22.2、14.8±23.6、14.0±13.0；②總路程(cm)為347.5±252.3、342.0±256.1、523.7

7、±1044.8、608.5±457.1、372.0±606.9、461.5±346.9；③平臺象限停留時間(s)為53.1±5.5、46.8±6.5、47.4±11.6、45.3±10.0、41.2±6.3、38.9±6.0；④平臺象限停留路程占總路程百分比(％)為40.0±5.2、35.2±4.5、34.8±6.8、37.7±12.6、32.0±3.7、31.1±4.4；⑤平均速度(cm/s)為26.5±2.2、30.2±2.1、26

8、.2±3.0、21.7±1.3、26.3±1.7、23.6±2.4；⑥經(jīng)過平臺次數(shù)(次)為2.3±1.5、1.8±1.3、2.2±1.0、1.5±1.0、2.3±1.8、1.7±1.0。與A、O2組比較，T2組逃避潛伏期明顯延長(P<0.01)，與T1、T3、T4組比較，T2組逃避潛伏期延長(P<0.05)，其余各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。T2組平均速度明顯低于A、O2、T1、T3組(P<0.01)。
　　 結(jié)論：大鼠

9、吸入國產(chǎn)異氟醚(寧芬)30min后，1d內(nèi)對學(xué)習(xí)記憶有一定程度影響，1d后學(xué)習(xí)記憶逐漸改善，自行恢復(fù)到麻醉前水平，提示國產(chǎn)異氟醚(寧芬)的使用可能與術(shù)后短期POCD的發(fā)生有一定關(guān)系，這種變化是可逆的，不會造成長期的學(xué)習(xí)記憶損害。
　　 第二部分國產(chǎn)異氟醚(寧芬)對成年大鼠S100、Tau、Aβ的影響
　　 目的：通過測定經(jīng)Morris水迷宮訓(xùn)練的成年大鼠吸入國產(chǎn)異氟醚(寧芬)后血漿S100、海馬Tau、Aβ的變化，進(jìn)一步

10、探討異氟醚與術(shù)后認(rèn)知功能障礙(POCD)的關(guān)系。
　　 方法：將第一部分實驗的各組大鼠隨機(jī)分為兩個亞組，(每組N=3，共6組)，其中任意一個亞組，待麻醉蘇醒行水迷宮訓(xùn)練后將大鼠以1％戊巴比妥鈉(4mg/100g)腹腔注射麻醉，取眼眶血2～4ml置于肝素管內(nèi)，6℃下3000r/min離心15min取上清液，酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA法)檢測血漿S100蛋白含量。另一亞組大鼠開胸，以4％多聚甲醛經(jīng)主動脈行腦灌注后斷頭，取腦組織，

11、石蠟包埋、切片，免疫組化染色測定海馬Tau、Aβ的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)S100蛋白(pg/ml)檢測結(jié)果分別為：211.5±105.4、197.2±81.9、142.6±42.4、329.1±73.4、214.6±90.2、158.6±45.1。T2組S100蛋白含量高于A、T3組(P<0.05)，明顯高于O2、T1、T4組(P<0.01)。(2)CA1區(qū)Tau蛋白平均光密度分別為：0.189±0.024、0.194±0.

12、023、0.207±0.020、0.210±0.031、0.195±0.022、0.193±0.018；CA3區(qū)Tau蛋白平均光密度分別為：0.206±0.011、0.203±0.023、0.214±0.021、0.217±0.014、0.208±0.010、0.218±0.016。T2組與A組比較，海馬CA1區(qū)Tau蛋白陽性反應(yīng)平均光密度增加(P<0.05)；CA3區(qū)Tau蛋白陽性反應(yīng)平均光密度各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

13、(3)CA1區(qū)Aβ蛋白平均光密度分別為：0.147±0.013、0.151±0.002、0.147±0.005、0.147±0.005、0.147±0.011、0.150±0.004；CA3區(qū)Aβ蛋白平均光密度分別為：0.145±0.011、0.148±0.005、0.158±0.005、0.149±0.006、0.150±0.011、0.149±0.006。T1組與A、T2組比較，CA3區(qū)Aβ蛋白陽性反應(yīng)平均光密度增加(P<0.05)