異氟醚對老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和海馬蛋白質(zhì)組的影響.pdf

1、目的:應(yīng)用"Y"迷宮訓(xùn)練檢測異氟醚吸入全身麻醉后老齡大鼠學(xué)習(xí)能力和記憶功能變化，采用雙向凝膠蛋白電泳結(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)篩選和鑒定相應(yīng)情況下海馬蛋白質(zhì)組表達(dá)差異，旨在進(jìn)一步確定異氟醚麻醉后老齡大鼠記憶和學(xué)習(xí)功能的變化情況，探討異氟醚對老齡大鼠海馬蛋白質(zhì)組是否有影響以及影響程度，盡可能找出與麻醉后認(rèn)知功能改變相關(guān)的特異蛋白。 方法: (1)本課題的第1階段：①.隨機(jī)將75只22月齡SD大鼠分為C組(對照組，n=35)和Ⅰ組(異

2、氟醚組，n=40)。C組吸入含40％氧氣的空氧混合氣體2小時。Ⅰ組以3％異氟醚+40％氧氣吸入誘導(dǎo)，隨后以1.2％異氟醚+40％氧氣維持全身麻醉2小時。②.兩組大鼠于吸氧對照或麻醉蘇醒后24小時開始應(yīng)用"Y"型迷宮連續(xù)3天訓(xùn)練檢測其學(xué)習(xí)記憶功能，每天訓(xùn)練20次，記錄正確反應(yīng)次數(shù)、全天總反應(yīng)時間、主動回避次數(shù)和三天學(xué)會率。③.麻醉結(jié)束后24小時和72小時分別于兩組中隨機(jī)抽取5只大鼠，取左側(cè)海馬-80℃凍存。取右側(cè)海馬行尼氏染色和電鏡觀察。

3、 (2)本課題的第2階段：取凍存的左側(cè)海馬組織進(jìn)行勻漿、裂解、水化制備蛋白溶液樣品，應(yīng)用雙向凝膠電泳獲取含有蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的凝膠，然后考染顯色，掃描儀掃描獲取圖像，運(yùn)用軟件識別、合成、匹配，分析組間差異，切取凝膠中差異蛋白點(diǎn)，胰酶消化分解，ZipTip<'TM>脫鹽，經(jīng)質(zhì)譜分析，獲取肽指紋圖，登陸互聯(lián)網(wǎng)查詢結(jié)果以鑒定差異蛋白點(diǎn)。 結(jié)論: (1)老齡大鼠吸入1.2％異氟醚2小時后早期學(xué)習(xí)記憶能力下降，這一現(xiàn)象可能和海馬