異氟烷預(yù)處理對(duì)心臟瓣膜置換術(shù)患者心肌蛋白質(zhì)組的影響.pdf

1、研究目的：1.對(duì)異氟烷預(yù)處理對(duì)人缺血再灌注損傷心肌的保護(hù)作用進(jìn)行臨床觀察。2.采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究異氟烷預(yù)處理對(duì)人缺血再灌注損傷心肌蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響，尋找可能參與異氟烷預(yù)處理早期相心肌保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。3.用免疫印跡法檢測(cè)其中某些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，以進(jìn)一步確定這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)在異氟烷預(yù)處理心肌保護(hù)中的作用。
　　 研究方法：實(shí)驗(yàn)分三部分：(1)擇期心肺轉(zhuǎn)流術(shù)下行雙瓣膜置換術(shù)的風(fēng)濕性心臟聯(lián)合瓣膜病患者30例，隨機(jī)分為對(duì)照組(

2、n=15)和異氟烷預(yù)處理組(異氟烷組，n=15)。異氟烷組在麻醉誘導(dǎo)后吸入1.1％～1.2％(呼氣末濃度)異氟烷30 min，洗脫15 min。對(duì)照組不吸入異氟烷，其余用藥2組無(wú)區(qū)別。分別于麻醉誘導(dǎo)后吸入異氟烷前(T0)、主動(dòng)脈開(kāi)放30min(T1)、關(guān)胸后(T2)、主動(dòng)脈開(kāi)放6h(T3)、12h(T4)和24h(T5)測(cè)量和記錄肺動(dòng)脈導(dǎo)管數(shù)據(jù)：分別于T0、Tl、T3、T4和T5取血測(cè)血清肌鈣蛋白(cTnI)、肌酸磷酸激酶同工酶(CKM

3、B)濃度。分別于主動(dòng)脈阻斷前(上腔靜脈插管時(shí))和主動(dòng)脈開(kāi)放后(上腔靜脈退管時(shí))取部分右心耳組織，用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察心肌組織與細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化。(2)用雙向凝膠電泳法分離異氟烷組和對(duì)照組體外循環(huán)后心肌組織蛋白質(zhì)，經(jīng)圖像分析找出差異表達(dá)蛋白質(zhì)，再用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定部分差異表達(dá)蛋白質(zhì)。(3)根據(jù)第二部分結(jié)果，用免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)其中某些差異表達(dá)蛋白質(zhì)。
　　 研究結(jié)果：1.異氟烷組

4、和對(duì)照組MABP在T1～T4時(shí)和T0比較降低，PAOP在T2～T5時(shí)降低，SVR在T1～T5時(shí)降低，SV、SI在T1～T5時(shí)升高，CO、CI和LVSWI在T1～T5時(shí)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。異氟烷組PAOP在T5時(shí)和對(duì)照組比較降低，SV和SI在T4～T5時(shí)升高，CO、CI和LVSWI在T3～T5時(shí)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。異氟烷組和對(duì)照組cTnI、CKMB基礎(chǔ)值之間無(wú)顯著性差

5、別，異氟烷組T3后cTnI低于對(duì)照組，T1后CKMB低于對(duì)照組，2組間比較有顯著性差異(P<0.05)。光鏡與電鏡結(jié)果顯示異氟烷組心肌細(xì)胞損傷輕于對(duì)照組。2.蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果：2-DE圖像顯示對(duì)照組有417士15個(gè)蛋白點(diǎn)，異氟烷組有454+19個(gè)蛋白點(diǎn)。經(jīng)凝膠圖像分析找到差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)20個(gè)，基質(zhì)輔助激光解析.電離飛行時(shí)間對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，共鑒定出16個(gè)蛋白質(zhì)。其中，在異氟烷組有6個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)，3個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)，有1個(gè)新合

6、成的蛋白質(zhì)，但異氟烷組有10個(gè)蛋白質(zhì)未能得到匹配。這些蛋白質(zhì)包括細(xì)胞骨架蛋白(α-肌動(dòng)蛋白、α-肌球蛋白重鏈、結(jié)蛋白、波形蛋白)、代謝相關(guān)蛋白(醛糖還原酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、線粒體ATP酶)、轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白(普通轉(zhuǎn)錄因子ⅢC、轉(zhuǎn)錄因子AP2、鋅指蛋白771)、離子通道蛋白(瞬時(shí)型陽(yáng)離子感受器通道)等。3.采用免疫印跡技術(shù)對(duì)其中a-肌動(dòng)蛋白(200號(hào))、α-肌球蛋白重鏈(277號(hào))、波形蛋白(221號(hào))、線粒體ATP酶(47號(hào))進(jìn)行驗(yàn)證

7、，發(fā)現(xiàn)上述四種蛋白質(zhì)的表達(dá)在異氟烷預(yù)處理組明顯上調(diào)。
　　 研究結(jié)論：1.異氟烷預(yù)處理后人心肌組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜發(fā)生變化，這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)可能通過(guò)減少細(xì)胞骨架破壞、改善能量代謝等發(fā)揮異氟烷預(yù)處理早期相的心肌保護(hù)作用。這是首次發(fā)現(xiàn)異氟烷預(yù)處理早期相保護(hù)作用與α-肌動(dòng)蛋白、α-肌球蛋白重鏈、結(jié)蛋白、波形蛋白、醛糖還原酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、線粒體ATP酶、普通轉(zhuǎn)錄因子ⅢC、轉(zhuǎn)錄因子AP2、鋅指蛋白771、瞬時(shí)型陽(yáng)離子感受器通道有關(guān)