TAK1基因在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜組織的表達(dá)與活化.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性進(jìn)行性自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)滑膜炎及對(duì)稱性關(guān)節(jié)骨、軟骨破壞為主要特征。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病因尚不清楚，但我們已經(jīng)明確它的發(fā)生與免疫異常有關(guān)，多種炎性細(xì)胞因子在發(fā)病過(guò)程中起著極為重要的作用。這些細(xì)胞因子通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的級(jí)聯(lián)放大作用，導(dǎo)致蛋白酶、生長(zhǎng)因子和許多與炎癥過(guò)程相關(guān)化合物的含量變化。參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑種類繁多、錯(cuò)綜復(fù)雜，其中兩種途徑發(fā)揮

2、重要作用：絲裂原活性蛋白激酶(MAPKs)途徑和核因子-κB(NF-κB)途徑。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶(TAK1，MEKK7)是MAP3K家族的成員之一，能被多種細(xì)胞因子包括IL-1β，IL-18，TNF-α等激活，處于這兩條途徑的分支點(diǎn)上。TAK1作為炎癥反應(yīng)中細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)上游重要的激酶，可能對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前已有研究表明在骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中TAK1-定規(guī)模的表達(dá)，并且阻遏TAK1基因可以使其下

3、游炎性因子表達(dá)減少。 本實(shí)驗(yàn)采用病例對(duì)照研究分別檢測(cè)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨性關(guān)節(jié)炎(OA)及非關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中TAK1基因mRNA和蛋白的表達(dá)，并比較其活性差異，以驗(yàn)證TAK1與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的相關(guān)性，為進(jìn)一步從分子水平深入探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為臨床上治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供新靶點(diǎn)。 材料與方法： 一、實(shí)驗(yàn)材料 1、23例膝關(guān)節(jié)滑膜組織標(biāo)本來(lái)源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科住

4、院患者。其中10例為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，7例為骨性關(guān)節(jié)炎患者，6例為行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見(jiàn)異常的病人。 2、RT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒。 3、Western印跡雜交相關(guān)試劑。 二、實(shí)驗(yàn)方法 1、RT-RCR實(shí)驗(yàn)對(duì)病例組及對(duì)照組TAK1基因mRNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 2、Western印跡雜交檢測(cè)病例組及對(duì)照組TAK1蛋白的表達(dá)水平。 3、Western印跡雜交方法檢測(cè)病例組及對(duì)照組TAK1激酶活性

5、差異。 結(jié)果： 1、RT-PCR的結(jié)果提示TAK1mRNA在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中有明顯的表達(dá)；在行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見(jiàn)異常的病人滑膜組織中表達(dá)最低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2、Western印跡雜交表明TAK1蛋白在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中有明顯的表達(dá)；在行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見(jiàn)異常的病人滑膜組織中表達(dá)最低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3、以磷酸化抗體行Western印跡雜交提示，在