雙苯氟嗪代謝物對離體大鼠基底動(dòng)脈的舒血管活性及機(jī)制研究.pdf

1、自人類研究藥物治療疾病開始,藥物代謝則被認(rèn)為是影響藥物作用的最重要因素之一。其中,研究藥物的代謝物是藥物代謝研究中不可缺少的一部分。
　　 藥物進(jìn)入機(jī)體后即與機(jī)體間發(fā)生一系列的相互作用,使其結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。在這個(gè)過程中,一些藥物經(jīng)代謝失去了藥理活性,隨尿和糞便最終排出體外;但也有一些藥物則通過代謝產(chǎn)生了有藥理活性或者毒性的代謝物。這些代謝物可能與藥物的治療作用密切相關(guān),在某些情況下,代謝物有活性甚至其活性超過其母體藥物,在藥物治

2、療中發(fā)揮著重要的作用;而有些代謝物在代謝中可能會有較長的半衰期或表現(xiàn)為非線性動(dòng)力學(xué)消除,這時(shí)必須考慮代謝物的可能蓄積作用,以及由此帶來的藥物的蓄積中毒反應(yīng);代謝物有時(shí)具有治療作用之外的活性,或者具有毒副作用,甚至具有潛在的致癌、致畸和致突變作用,影響藥物治療的安全性。
　　 因此,研究藥物代謝物的活性對更好地設(shè)計(jì)新藥,保證臨床用藥的安全性及有效性有著十分重要的意義。
　　 雙苯氟嗪(dipfluzine,Dip)是河北醫(yī)

3、科大學(xué)藥學(xué)院按第Ⅳ類鈣拮抗劑桂利嗪(腦益嗪,cinnarizhine,Cin)和中樞多巴胺受體阻斷劑氟哌啶的化學(xué)結(jié)構(gòu),首創(chuàng)設(shè)計(jì)合成的一個(gè)新型的桂利嗪類衍生物。它對腦血管有高度選擇性擴(kuò)張作用,能抑制血小板聚集及血栓形成,可有效防止腦缺血所致的腦水腫,縮小腦梗死范圍,改善腦缺血所致的體感誘發(fā)電位紊亂和腦血流減少,降低腦缺血所致的興奮性氨基酸濃度升高,且上述作用均顯著強(qiáng)于桂利嗪,顯示出其作為腦血管疾病治療藥物的潛在價(jià)值。
　　 本實(shí)驗(yàn)

4、室已研究了雙苯氟嗪在大鼠體內(nèi)的代謝途徑及其代謝物,表明在大鼠體內(nèi)雙苯氟嗪主要經(jīng)哌嗪環(huán)1-和4-氮脫烷基代謝,一些代謝物再與葡萄糖醛酸和/或硫酸結(jié)合。根據(jù)大鼠尿液中雙苯氟嗪及其代謝物紫外吸收峰的高低,推算雙苯氟嗪在大鼠體內(nèi)主要以1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮、4-羥基-二苯甲酮、4-氟-γ-羥基苯丁酸、二苯甲醇和二苯甲酮等代謝產(chǎn)物形式從尿中排出體外。目前,尚無對雙苯氟嗪代謝物舒血管活性的研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究雙苯氟嗪及其

5、代謝物對高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的影響,探討是否存在活性代謝物,并研究其舒血管機(jī)制。
　　 第一部分雙苯氟嗪代謝物舒血管的活性研究
　　 目的:通過對比雙苯氟嗪及其代謝物對高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的抑制作用,找出具有舒血管活性的代謝物。
　　 方法:急性分離250 g左右雄性大鼠基底動(dòng)脈,選擇無分支段0.5 mm連同其前后各2 mm血管,穿套于Pressure Myogragh System Model120CP

6、浴槽中兩根極細(xì)玻璃電極上,并結(jié)扎固定,管腔給予70 mmHg壓力,實(shí)驗(yàn)過程中持續(xù)向浴槽內(nèi)通入95％O2+5％CO2混合氣,溫度保持37℃。穩(wěn)定一小時(shí)后分別采用表面灌流給藥,觀察不同濃度的雙苯氟嗪及其代謝物對高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的抑制作用。
　　 結(jié)果:
　　 1血管的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在無外界刺激時(shí),本研究所用大鼠基底動(dòng)脈血管直徑在持續(xù)灌流5 min、10 min、15 min、30 min和6

7、0 min后,血管的收縮幅度分別為100.47％±1.12％、99.67％±1.21％、100％±1.86％、100.83％±3.05％、101.14％±2.99％,與穩(wěn)定前的血管直徑100％±0.00％相比無明顯改變(P＞0.05),且間隔1 h先后兩次給予高K+-PSS液后,血管直徑的收縮幅度分別為:63.84％±1.94％和64.38％±3.64％,對于血管初期的血管直徑100％±0.00％有顯著收縮(P＜0.05),但二者之間無

8、顯著性差別(P＞0.05),提示在本實(shí)驗(yàn)條件下,該基底動(dòng)脈的反應(yīng)活性至少可以穩(wěn)定60 min。
　　 2雙苯氟嗪舒血管活性的測定
　　 2.1雙苯氟嗪對高鉀所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流雙苯氟嗪時(shí)50 mol/L KCl收縮血管的幅度為100％,不同濃度(10-10～10-3 mol/L)雙苯氟嗪對50 mol/L KCl收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0180±0.0069、0.0364±0.018

9、7、0.0545±0.0329、0.0651±0.0323、0.2011±0.0287、0.4802±0.0491、0.5315±0.0513、0.5363±0.0597,其IC50=1.8277E-6±2.2228E-7。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雙苯氟嗪對高鉀預(yù)刺激血管有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示雙苯氟嗪可能是通過阻滯電壓依賴型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 2.2雙苯氟嗪對5-HT所致血管收縮的抑制作用
　

10、　 以未灌流雙苯氟嗪時(shí)5×10-7mol/L5-HT收縮血管的幅度為100％,計(jì)算不同濃度(10-10～10-3 mol/L)雙苯氟嗪對5×10-7 mol/L5-HT收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0203±0.0092、0.0404±0.0268、0.1410±0.0538、0.2184±0.0521、0.5069±0.0499、0.7903±0.0518、0.9455±0.0583、0.9412±0.0614,其IC50=9

11、.5916E-7±2.3346E-7。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雙苯氟嗪對5-HT預(yù)刺激血管也有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示雙苯氟嗪也能是通過阻滯受體操控型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 3雙苯氟嗪代謝物舒血管活性測定
　　 3.11-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對高鉀所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮時(shí)50 mol/L KCl收縮血管的幅度為100％,不同濃度(1

12、0-8～10-4 mol/L)1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對50mol/L KCl收縮血管作用的抑制百分率分別:0.0432±0.0114、0.0748±0.0160、0.2756±0.0270、0.4504±0.0115、0.5285±0.0136,其IC50=1.1454E-6±3.093E-7。結(jié)果顯示,1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對高鉀預(yù)刺激血管有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示1-(4-氟苯基)-4-哌

13、嗪基丁酮可能是通過阻滯電壓依賴型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 3.21-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對5-HT所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮時(shí)5×10-7 mol/L5-HT收縮血管的幅度為100％,計(jì)算不同濃度(10-8～10-4 mol/L)1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對5×10-7 mol/L5-HT收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0301±0.0106、

14、0.1661±0.0232、0.7529±0.0302、0.9667±0.0125、0.9816±0.0099,其IC50=3.9663E-6±1.1595E-9。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對5-HT預(yù)刺激血管也有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮也能通過阻滯受體操控型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 結(jié)論:
　　 雙苯氟嗪及其代謝物1-(4-氟苯基)-

15、4-哌嗪基丁酮對高鉀/5-HT所致血管收縮有明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。而代謝物4-羥基-二苯甲酮、4-氟-γ-羥基苯丁酸、二苯甲醇和二苯甲酮對高鉀/5-HT所致血管收縮沒有明顯的抑制作用。以上結(jié)果說明雙苯氟嗪代謝物中只有1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮具有舒血管活性,且舒張血管的機(jī)制可能與抑制電壓依賴型和受體操縱型鈣離子通道有關(guān)。
　　 第二部分雙苯氟嗪代謝物舒血管機(jī)制的研究
　　 目的:通過比較雙苯氟嗪以

16、及活性代謝物對高鉀/5-HT預(yù)收縮內(nèi)皮完整/去內(nèi)皮血管的抑制作用,探討雙苯氟嗪以及活性代謝物的舒血管機(jī)制。
　　 方法:在內(nèi)皮完整/去內(nèi)皮血管中測定雙苯氟嗪以及活性代謝物對高鉀/5-HT預(yù)收縮的抑制作用。在內(nèi)皮完整血管測定內(nèi)皮舒張因子抑制劑對雙苯氟嗪以及活性代謝物抑制作用的影響。在內(nèi)皮完整血管測定鉀離子通道抑制劑對雙苯氟嗪以及活性代謝物抑制作用的影響。
　　
　　 結(jié)論:雙苯氟嗪及其代謝物1-(4-氟苯基)-4