鞘內(nèi)注射布美他尼對大鼠急性疼痛行為及鈉鉀氯聯(lián)合轉運蛋白1表達的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　疼痛通常是由于各種傷害性刺激所引發(fā)，如各種物理性及化學性因素均可成為傷害性刺激而導致疼痛的發(fā)生。在組織細胞損傷或炎癥狀態(tài)下，相關細胞因子及活性物質釋放增多，如白介素1（IL-1）、鉀離子、5-羥色胺、乙酰膽堿、緩激肽、組胺等等，通過作用于傷害性感受器而激發(fā)疼痛反應。作為傷害性感受器，在全身皮膚及各類組織中分化程度最低的游離神經(jīng)末梢能將各種形式的傷害性刺激轉換成一定編碼型式的神經(jīng)沖動，沿著慢傳導的直徑較細的有髓

2、鞘（Aδ纖維）和最細的無髓鞘傳入神經(jīng)纖維（C纖維），經(jīng)背根神經(jīng)節(jié)傳到脊髓后角，再經(jīng)由對側的腹外側索傳至較高級的疼痛中樞—丘腦、其他腦區(qū)以及大腦皮質，引起疼痛的感覺和反應。
　　術后疼痛的機制獨特而復雜，術后疼痛過敏的形成與疼痛的外周敏化及中樞敏化有著密切的關系。炎癥因子通過相應的離子通道、受體作用于外周傷害感受器，使傷害性感受器興奮性及敏感性發(fā)生改變而產(chǎn)生外周痛覺敏化。而在外周敏化及持續(xù)傷害性刺激下，通過激活基因表達等多種機制導致

3、脊髓背角和大腦中樞產(chǎn)生中樞性敏化。
　　既往痛覺過敏相關研究多著重于受體-遞質的阻斷、信號傳入及興奮性神經(jīng)元功能上調等方面。從所周知，γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric，GABA)與甘氨酸（Glycine，Gly）受體功能在疼痛的傳遞與抑制中起重要作用，氯離子通道作為影響GABA與Gly受體功能的關鍵因素越來越受到關注，并被學者認為將可能成為疼痛治療的新靶點。鈉鉀氯聯(lián)合轉運蛋白1（NKCC1）是神經(jīng)組織中氯離子平衡的主要調

4、控蛋白之一，目前已成為疼痛機制研究的熱點。
　　目前，在辣椒素致痛模型、福爾馬林致痛模型及關節(jié)炎模型中均已證實NKCC1在疼痛信號轉導中起重要作用。對于急性創(chuàng)傷性疼痛形成及持續(xù)過程中NKCC1的表達及作用如何，目前報導較少。因此，本實驗擬利用大鼠切口痛模型，通過鞘內(nèi)注射選擇性NKCC1抑制劑布美他尼，觀察其對大鼠術后疼痛行為及脊髓背根神經(jīng)節(jié)（DRG）NKCC1表達的影響，評估鞘內(nèi)注射布美他尼對大鼠術后痛覺過敏形成的作用，并探討其可

5、能機制，為臨床研究及應用提供理論參考。
　　方法：
　　成年雄性SD大鼠135只(由廣東省實驗動物中心提供)，體重250g～300g，清潔級。隨機數(shù)字表法分為對照組（n=27）、注藥組（n=36）、手術組（n=36）及實驗組（n=36）。對照組不作任何處理；注藥組鞘內(nèi)注射布美他尼100μg（20μl）；手術組行右足底切開手術；實驗組先鞘內(nèi)注射布美他尼100μg后行右足底切開手術。采用熱輻射法（熱痛敏）、von Frey細絲法

6、（機械痛敏）及疼痛累計評分法（疼痛保護反應）觀察與記錄術前、術后2h、4h、6h大鼠的行為學改變，采用免疫組化，熒光顯微鏡觀察各組術后2h、4h、6h背根神經(jīng)節(jié)（DRG）的NKCC1表達，并行陽性細胞計數(shù)。
　　結果：
　　1．熱痛閾的變化各組基礎熱痛閾差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與對照組比較，注藥組大鼠在注藥后2h、4h的熱痛閾升高（P<0.05），手術組與實驗組術后各時間點的熱痛閾均降低（P<0.05）；與手術組比

7、較，實驗組熱痛閾明顯高于手術組（P<0.05）。
　　2．機械痛閾的變化各組基礎機械痛閾差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與對照組比較，注藥組大鼠在注藥后2h的機械痛閾升高（P<0.05），手術組與實驗組術后各時間點的機械痛閾均降低（P<0.05），但手術組大鼠的機械痛閾又明顯低于實驗組（P<0.05）。
　　3．疼痛累計評分注藥組與對照組各觀察時間點的疼痛累計評分比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與對照組比較，手術組與

8、實驗組術后疼痛累計評分均升高（P<0.05），但手術組又明顯高于實驗組（P<0.05）。
　　4．NKCC1陽性細胞表達的變化與對照組比較，注藥組在各時間點陽性細胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），手術組及實驗組在各時間點陽性細胞計數(shù)均明顯增多（P<0.01）；組間比較，實驗組的陽性細胞計數(shù)又明顯少于手術組（P<0.01）。
　　結論：
　　1.鞘內(nèi)注射布美他尼能提高切口痛模型大鼠的熱痛閾值。
　　2.鞘內(nèi)注